磷脂酰丝氨酸含量的测定方法.pdfVIP

QB/TXXXXX—XXXX 附录A （规范性附录） 磷脂酰丝氨酸含量的测定方法 A.1蒸发光散射检测器法（仲裁法） A.1.1原理 试样经溶剂溶解或提取后，通过高效液相色谱分离，蒸发光散射检测器检测，外标法定量。 A.1.2试剂和溶液 a）正己烷：色谱纯。 b）异丙醇：色谱纯。 c）乙酸。 d）三乙胺。 e）氯仿-甲醇（90：10，体积比）。 f）磷脂酰丝氨酸标准品，纯度大于95%。 g）水：超纯水。 A.1.3标准溶液配制 准确称取适量磷脂酰丝氨酸标准品，用氯仿-甲醇溶液溶解并定容制成为80μg/mL～400μg/mL的系 列标准品溶液。 A.1.4仪器和设备 a）高效液相色谱仪，蒸发光散射检测器。 b）分析天平。 A.1.5分析步骤 A.1.5.1试样制备 准确称取适量样品至容量瓶中，用氯仿-甲醇溶液溶解并定容，稀释配制成磷脂酰丝氨酸含量在标 准品系列溶液浓度范围内的样品溶液。 A.1.5.2 参考色谱条件： a）色谱柱：lichrosphere100diol （4mm×125mm），或等效色谱柱； b）流动相：流动相A为正已烷-异丙醇-乙酸-三乙胺（820:170:10:0.8，体积比），流动相B为异丙醇 -水-乙酸-三乙胺（850:140:10:0.8，体积比）； c）流量：1mL/min； d）测定温度：30℃； e）进样量：10μL； f）蒸发温度：80℃； g）雾化温度：50℃； h）氮气流速：1L/min； i）梯度洗脱：按表5执行。 表A.1 梯度洗脱程序 步骤 运行时间，min 流动相A，% 流动相B，min 1 0 100 0 2 20 50 50 3 25 0 100 4 29 0 100 1 QB/TXXXXX—XXXX 5 30 100 0 6 35 100 0 A.1.6测定 将标准溶液、试样溶液于A.1.5.2项色谱条件下进行测定，以标准溶液峰面积做对数后为纵坐标，标 准溶液浓度做对数后为横坐标，绘制双对数标准曲线，根据峰面积从双对数标准曲线查得试样溶液浓度。 A.1.7计算 试样中磷脂酰丝氨酸的含量按式（A.1）计算： −6 × 10 ×100%………………………………（A.1） 式中： w—试样中磷脂酰丝氨酸的含量，单位为（%）； ρ—试样溶液中磷脂酰丝氨酸的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； V—试样溶液的体积，单位为毫升（mL）； m—试样的质量，单位为克（g）。 取两次平行测定结果的算术平均值