燕麦β-葡聚糖含量的测定.pdfVIP

QB/TXXXX—XXXX 附 录 A （规范性） 燕麦β-葡聚糖含量的测定 A.1 原理 利用地衣聚糖酶（或称葡聚糖酶）和β-葡萄糖苷酶对样品中（1→3）（1→4）-β-D-葡聚糖（混联 β-D-葡聚糖，或简称β-葡聚糖）的酶解作用，由地衣聚糖酶专一性地水解β-葡聚糖成寡糖，β-葡萄糖苷 酶则将寡糖水解成葡萄糖；葡萄糖在葡萄糖氧化酶作用下生成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢在过氧化 物酶作用下，与4-氨基安替比林氧化缩合生成红色醌类化合物。此化合物在510nm有吸收，其吸光度值 与葡萄糖含量成正比。 A.2 试剂和材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。 A.2.1 试剂 A.2.1.1 葡萄糖标准品：纯度大于99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。 A.2.1.2 叠氮化钠（NaN ）。 3 A.2.1.3 二水合磷酸二氢钠（NaH PO ·2HO）。 2 4 2 A.2.1.4 三水乙酸钠（C H O Na·3H O）。 2 3 2 2 A.2.1.5 冰醋酸（CH COOH）。 3 A.2.1.6 磷酸二氢钾（KH PO ）。 2 4 A.2.1.7 氢氧化钠（NaOH）。 A.2.1.8 盐酸（HCl）。 A.2.1.9 4-羟基苯甲酸（C H O ）。 7 6 3 A.2.1.10 无水乙醇（C H O）。 2 6 A.2.1.11 葡萄糖氧化酶-过氧化物酶-4-氨基安替比林混合酶粉末：葡萄糖氧化酶（酶活力＞12000U）、 过氧化物酶（酶活力＞650U）和4-氨基安替比林（0.4mmol/L）。 1） A.2.1.12 地衣聚糖酶溶液 ：1000U/mL。 1） A.2.1.13 β-葡萄糖苷酶溶液 ：40U/mL。 1）A.2.1.10~12均可由Megazyme混联β-D-葡聚糖测定试剂盒提供。混联β-D-葡聚糖测定试剂盒是爱尔兰Megazyme公 司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本文件的使用者，并不表述对该产品的认可。如果还有其他产品具有 相同的效果，那么可使用这些等效产品。 A.2.2 试剂配制 A.2.2.1 氢氧化钠溶液（0.1mol/L）：准确称取0.4g 氢氧化钠（A.2.1.7），加90mL 水溶解，冷却后 定容至100mL。 A.2.2.2 盐酸溶液（0.1mol/L）：吸取0.9mL盐酸（A.2.1.8）用水稀释并定容100mL。 A.2.2.3 磷酸二氢钠缓冲液（20mmol/L、pH6.5）：称取3.12g 二水合磷酸二氢钠（A.2.1.3），加900mL 水溶解，用0.1mol/L 氢氧化钠溶液（A.2.2.1）调节pH6.5，定容至1000mL。该缓冲液在4℃下可存放 一个月。 A.2.2.4 乙酸钠缓冲液（200mmol/L、pH4.0）：移取7.6mL 冰醋酸（A.2.1.5）于900mL 水中，加入 4.8g 三水乙酸钠（A.2.1.4），溶解，用0.1mol/L 盐酸溶液（A.2.2.2）调节pH4.0，定容至1000mL。 A.2.2.5 乙酸钠缓冲液（50mmol/L、pH4.0）：量取250mL 乙酸钠缓冲液（A.2.2.4）稀释至1000mL。 7 QB/TXXXX—XXXX A.2.2.6 地衣聚糖酶溶液（50U/mL）：移取1.0mL地衣聚糖酶溶液（A.2.1.12），加入磷酸