诺唯赞试剂说明书 传统TA克隆 T4 DNA Ligase.pdfVIP

T4 DNA Ligase C301-01 Version 6.1 Vazyme biotech co., ltd. 产品简介 T4 DNA Ligase可催化 dsDNA 平末端或粘性末端相邻核酸的 5’磷酸末端和3’羟基末端形成磷酸二酯键，还可催化 RNA和双链中的 ssDNA 或 RNA 链连接，但不能催化全单链核苷酸连接。适用于标记 RNA 3‘-末端，环化 RNA和 DNA寡聚核苷酸以及克隆cDNA等核酸操作。 产品组成 组 分 C301-01 40,000 U 10 × Ligase Buffer* 1 ml T4 DNA Ligase (400 U/μl) 100 μl *Buffer在融解时，如果出现少量沉淀属正常现象，请颠倒混匀后使用。 储存条件 -20℃保存。 单位定义 在20 μl的连接反应体系中，6 μg的λDNA-Hind Ⅲ的分解物在16℃下反应30分钟时，有50%以上的DNA片段被连接所需要的酶量定义为1个 活性单位 (U) 。 质量控制 核酸外切酶残留检测：2000 U的本品和0.6 μg λ-Hind III在74℃下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。 核酸内切酶残留检测：2000 U的本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74℃下反应1小时，DNA电泳谱带不发生变化。 用途 1. DNA片段和载体DNA的连接。 2. DNA片段和Linker或Adaptor DNA 的连接。 使用实例：DNA片段和载体DNA的连接 1. 在微量离心管中制配制连接反应体系： 灭菌蒸馏水 To 10 μl 10 × Ligase Buffer 1 μl 插入片段*1 0.3 pmol 载体DNA*2 0.03 pmol T4 DNA Ligase (400 U/μl) 1 μl *1 插入片段与载体的摩尔比应在3:1～10:1之间。 *2 平末端载体与DNA片段进行连接时，应首先将载体进行去磷酸化处理，以防止其自身环化。 2. 16℃过夜反应 3. 转化 1) 将连接产物加入到100 μl感受态细胞中 (连接产物的体积不应超过感受态细胞体积的1/6)，轻轻弹匀，冰上孵育30分钟。 2) 将离心管置于42℃水浴，不要晃动，准确热激90秒后，立刻置于冰水浴中，静置2-3分钟。 3) 向离心管中加入900 μl LB或SOC培养基，150 rpm, 37℃振荡培养45分钟，使菌体复苏，抗性基因表达。 4) 2,500 g离心5分钟，去掉900 μl上清。用剩余培养基将菌体重悬，用无菌涂布棒在含有正确抗性的平板上轻轻涂匀。室温正置10分钟。 待菌液被平板吸收后，37℃倒置培养过夜。 8 注：如果使用超级感受态细胞 (转化效率10 cfu/μg)，可直接吸取100-200 μl孵育后的菌液涂板。剩余菌液可在4℃保存，一周之内都可重新涂板。 诺唯赞生物 网址/ 咨询热线/400-600-9335 销售/sales@ 技术支持/support@ 技术服务/service@ Vazyme Biotech Co., Ltd Web/ Tel/400-600-9335 Sales/sales@ Support/support@ Service/service@