保健食品辅助改善记忆检验方法.pdfVIP

保健食品辅助改善记忆检验方法 1 动物实验 1.1 跳台实验 1.1.1 原理 反应箱底铺有通 36v 电的铜栅，动物受到电击，其正常反应是跳上箱内绝缘的平台以避 免伤害性刺激。多数动物可能再次或多次跳至铜栅上，受到电击又迅速跳回平台，如此训练 5min，并记录每鼠受到电击的次数或叫错误次数，以此作为学习成绩。24h 或 48h 重作测 验，此即记忆保持测验。记录受电击的动物数、第一次跳下平台的潜伏期和 3min 内的错误 总数。停止训练 5 天后（也可以在训练后的一周、两周或其它时间点）进行记忆消退实验。 1.1.2 仪器与试剂 跳台仪：该装置为 × × 3 的被动回避条件反射箱，用黑色塑料板分隔成 间。 10 10 60cm 5 底面铺以铜栅，间距为 0.5cm，可以通电，电压强度由一变压器控制。每间左后角置一高和 直径均为 4.5cm 的绝缘平台。 试剂：樟柳碱、东莨菪碱、环已酰亚胺、乙醇。 1.1.3 实验方法 实验动物 推荐使用近交系小鼠。断乳鼠或成年鼠 （ － ）。用于改善老年人记忆 1.1.3.1 18 22g 的产品必须采用成年鼠。雌雄均可，单一性别，每组 10－15 只。 1.1.3.2 剂量分组及受试样品给予时间 实验设三个剂量组和一个阴性对照组，以人体推荐量的 10 倍为其中的一个剂量组，另 设二个剂量组，必要时设阳性对照组。受试样品给予时间 30 天，必要时可延长至 45 天。 1.1.3.3 实验方法及步骤 1.1.3.3.1 受试样品对正常小鼠记忆的影响 末次给样后次日 （或一次给样后 ）开始训练。将动物放入反应箱内 （台上、台下）适 1h 应环境 3min，然后将动物放置反应箱内的铜栅上，立即通以 36v 的交流电。动物受到电击， 其正常反应是跳回平台（绝缘体），以躲避伤害性刺激。多数动物可能再次或多次跳至铜栅 上，受到电击又迅速跳回平台上。训练一次后，将动物放在反应箱内的平台上，记录 5min 内各鼠跳下平台的错误次数和第一次跳下平台的潜伏期，以此作为学习成绩。 或 后 24 48h 进行重测验，将小鼠放在平台上，记录各鼠第一次跳下平台的潜伏期、各鼠 3min 内电击次 数和受电击的动物数总数，同时计算出现错误反应的动物的百分率 （受电击的动物数占该组 动物总数的百分率）。停止训练 5 天后（包括第 5 天）可以在不同的时间进行一次或多次记 忆消退实验（方法同重测验）。 1.1.3.3.2 受试样品对记忆障碍模型小鼠的影响 1.1.3.3.2.1 造模 记忆获得障碍模型制造：训练前 10min 腹腔注射樟柳碱或东莨菪碱 5mg/kg BW； 记忆巩固障碍模型制造：训练前 10min 腹腔注射环已酰亚胺 120mg/kg BW； 记忆再现障碍模型制造：重测验前 30min 灌胃 30%的乙醇 10mL/kg BW。 1.1.3.3.2.2 记忆测试的操作方法：同 1.1.3.3.1。 1.1.4 数据处理及结果判定 潜伏期结果为计量资料，可用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验， ，结论：数差性 值 ， ， 方差齐，计算 值， 值 F F P 0.05 F F F0.05 0.05 用验数的方进行计方差齐的数据 行的量，方差齐，用的数据进行计量 方差齐的的，用检验进行计 数 3min