第三章第二节基因工程载体.pptVIP

第二节 基因工程的载体 种类: 质粒 噬菌体 腺病毒载体 逆转录病毒载体等 第一页，共三十三页。 质粒载体 一、质粒的一般生物学特性 二、质粒DNA的分离与纯化 三、质粒载体的构建及类型 四、常用质粒载体举例 第二页，共三十三页。 一、质粒的一般生物学特性 （一）、质粒DNA 1、质粒是细菌染色体外能够自主复制的环形双链的DNA分子。 2、质粒DNA分子可以持续稳定地处于染色体外地游离状态，但在一定地条件下又会可逆地整合到寄主染色体上，随着染色体地复制而复制，并通过细胞分裂传递到后代。 3、质粒DNA不仅能在细菌中复制，并且在添加真核复制信号和启动子后，可以构建出能在原核和真核细胞中均可复制的穿梭质粒，并在真核细胞中表达，因此这类载体在基因工程中应用广泛。 4、环形双链的质粒DNA分子具有三种不同的构型：共价闭合环状DNA（cccDNA），开环DNA（ocDNA），线性DNA（cDNA），具有不同的电泳迁移率，可在琼脂糖凝胶电泳中分开。 第三页，共三十三页。 第四页，共三十三页。 （二）、质粒的拷贝数与不亲和性 1、质粒的拷贝数是指某种质粒在一个细菌细胞内的数目。 根据每个寄主细胞中质粒拷贝数的多少，把质粒分为严紧型复制质粒（拷贝数少，为1-5个）与松弛型复制质粒（拷贝数多，可达10-200份拷贝）。因此，作为载体的质粒应该是松弛型的。