2 编制说明《植物源性食品中叶绿素的测定 高效液相色谱法》.docx

《植物源性食品中叶绿素的测定 高效液相色谱法》 农业行业标准编制说明 起草单位：农业农村部食物与营养发展研究所。 负责人：朱大洲 联系电话邮箱：zhudazhou@caas.cn 一、工作简况，包括任务来源、协作单位、主要工作过程、标准主要起草人及其所做的工作等； （一）任务来源 根据农质标函〔2020〕128号农业农村部农产品质量安全监管司关于下达2020年农业国家标准和行业标准制修订项目计划的通知（2020年7月31日印发）,由农业农村部食物与营养发展研究所主持承担《植物源性食品中叶绿素的测定 高效液相色谱法》的制定（项目编号：HYB-20144），承担方法建立、方法验证及相关起草工作。 （二）主要起草单位 农业农村部食物与营养发展研究所等。 （三）编写人员与分工 表1. 主要起草人员信息及任务分工 姓名 单位 职称 专业特长及分工 （四）主要工作过程 （应包含起草、征求意见、送审等环节的时间及具体情况。） 2020年7月至2020年9月，成立了标准起草小组，负责标准起草、验证、征求意见等工作；在前期示范推广应用的基础上，启动制标程序，着手调研与资料收集，标准编制小组查阅收集了国内外相关方法、论文等资料文献，比较研究了国内外的不同测定方法的优缺点，为本标准制定提供了基础资料支撑。 2020年10月至2020年11月，收集有代表性的样品，分析检测，以验证标准的适用性。 2020年12月至2021年6月，完成叶绿素检测试验条件优化、方法建立、方法验证等工作。 2021年7月至2022年3月，完成《植物源性食品中叶绿素 高效液相色谱法》标准草案、编制说明的编写及相关材料的准备。 二、标准编制原则和确定标准主要内容（如技术指标、参数、公式、性能要求、试验方法、检验规则等）的论据（包括试验、统计数据），修订标准时，应增列新旧标准水平的对比； （一）标准编制依据和原则 本标准的编写制定过程以提高方法选择性、精密度、灵敏度、准确度和分析效率，降低分析成本为总原则。力求反映科学技术的先进成果和先进经验，使用性能的普遍性，包括方法精密度、准确度、灵敏度等方面能满足要求，确保标准，保持技术上的先进性，又具有经济上的合理性。遵循了标准制定过程中的先进性、经济性和适用性原则。 在标准的制定过程中严格遵循国家有关方针、政策、法规和规章，严格执行强制性国家标准和行业标准。在GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》和GB/T 20001.4-2015《标准编写规则 第4部分：试验方法标准》的指导下，与同体系标准及相关的各种基础标准以及配套使用的取样、试剂规格等标准相衔接，遵循了政策协调统一性原则。 在标准制定过程中力求做到：技术内容的叙述正确无误；文字表达准确、简明、易懂，标准的构成严谨合理，内容编排、层次划分等符合逻辑与规定。 （二）标准主要内容 通过查阅文献、专利和相关标准，明确了植物源性食品中叶绿素定量测定主要技术方法，通过系统研究确定叶绿素的高效液相色谱测定方法，主要内容包括标准适用范围、规范性引用文件、原理、试剂、仪器设备、分析步骤、分析结果的表述等。 首先确定叶绿素的液相色谱参数，优化液相条件，提取条件，研究了方法检出限和定量限，加标回收率和测定精密度，通过三方验证检验方法的可靠性。 三、主要试验（或验证）的分析、综合报告，技术经济论证，预期的经济效果； （一）仪器条件的选择 仪器条件的选择包括流动相和检测波长。 波长扫描：3D全波长扫描模式。 流动相：甲醇-水梯度洗脱。 图1 叶绿素a3D全波长扫描谱图 图2 叶绿素b3D全波长扫描谱图 由图1和图2可知，叶绿素a最佳吸收波长是665 nm，叶绿素b最佳吸收波长是468 nm。 对比甲醇-水梯度洗脱程序，结果显示甲醇等度洗脱得到叶绿素a和叶绿素b分离度大于2，峰形对称性良好。 确定最佳仪器条件为： 色谱柱：C18色谱柱，5 μm，150 mm×4.6 mm（内径）或相当者； 柱温：30℃； 流动相：甲醇； 流速：1.0 mL/min； 检测波长：468 nm，665 nm； 进样量：10 μL。 （二）方法条件的优化 1、试样的制备 试样取可食部分经匀浆机匀浆或高速粉碎机或组织捣碎机粉碎均匀后，储存于样品瓶中，样品现用现制备。 称取干样品0.1 g-0.5 g，湿样品0.5 g-2.0 g（样品精确至0.0001 g）。 2、试样前处理条件的选择和优化 在参考国内外方法和文献研究的基础上，以提取溶剂的类型（A）、提取方式（B）、提取时间（C，min）为考察因素，叶绿素提取率的高低为评价指标，采用L16(43)正交试验设计对绿宝石甜瓜、黑米和菠菜中叶绿素的提取方法进行优化。因素和水平见表2。 表2. 因素与水平 水平 因素