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利用微量同时蒸馏技术测定烟草中酮类香味物质 1 前言 烟草中类异戊二烯的降解会形成大量的香味物质，其中大马酮、巨豆三烯酮 等酮类香味物质（见图一）对于卷烟的吸味、愉快程度和满足感都具有较强的影 响，是烟草中最主要的致香物质，其对烟草品质以及卷烟烟气的重要性都是不可 ［］ 1 或缺的 。 国内外众多学者已经对烟草中酮类香味化合物的分布以及香气特征等情况进行 了研究，对其的分析手段主要是利用水蒸气蒸馏（SD）、顶空（HS ）、固相微 萃取（SPME）、固相吸附溶剂洗脱（SPTE）和同时蒸馏萃取（SDE）等技术对 ［－ ］ 样品中的香气成分进行提取，结合气相色谱技术进行测试 2 7 。某些方法存在前 处理步骤复杂等缺点，而一些前处理较为简单的方法却又难以准确定量。本文充 分考虑到烟草样品的特点，尝试了用微量同时蒸馏萃取（MSDE ）技术对烟草中 茄酮、大马酮等酮类物质分析，通过实验摸索建立了一套重现性好、易于操作的 测定方法。其相比于传统的SDE 技术，所需的样品处理步骤有所减少，并且它 还有样品用量少、GC 图形好、易定量分析等优点。 图一 烟草中主要中性香气物质分子结构 2 材料与方法 2.1 供试材料 国内外不同产地2003 烟叶样品，以中部烟叶为主，原烟经等级平衡后去梗， 去梗烟叶粉碎后过40 目筛，平衡水分后作为测试样品。 2.2 仪器和试剂 仪器：微量同时蒸馏萃取装置（自制）、Agilent5972 气质联用仪、恒温水浴 锅、电加热套、低温恒温槽 试剂：二氯甲烷（色谱纯） 标样化合物：乙酸苯乙酯、香叶基丙酮、β-紫罗兰酮 图二 MSDE 装置图 2.3 溶液的配制 （1）内标溶液。配制浓度为50mg/ml 的乙酸苯乙酯作为内标，以二氯甲烷 为溶剂。 （2 ）标准溶液。取紫罗兰酮、香叶基丙酮各20mg 置于50ml 容量瓶中，用 二氯甲烷溶解、定容至50ml 。分别取1.0,2.0,5.0,10.0ml 上述溶液并取1ml 内标溶 液用二氯甲烷定容至50ml 。 2.4 实验方法 准确称取10.0g 烟草或烟草制品粉末于蒸馏室烧瓶内，用微量注射器加入 50.0μl 内标溶液，加入300ml 蒸馏水。在MSDE 装置收集室体中加入4ml 左右二 氯甲烷。连接MSDE 装置各部件后，如图二，开启恒温水浴锅对收集室进行加热。 开启低温恒温槽提供冷凝水。待收集室内二氯甲烷开始回流后开启电加热套对蒸 馏室进行加热。沸腾后开始计时，控制电加热套加热强度保持沸腾状态。5 小时 后先关闭电加热套电源。待冷却后关闭恒温水浴锅电源。取下收集室，用氮气吹 至2ml 左右，将样品置于进样瓶中。 2.5 GC-MS 分析条件 弹性毛细管柱50m×0.20mm id×0.33μm df，固定液 （Ultra-2 ）；进样量：2μL ， 分流进样，分流比5:1；进样口温度：280 ℃；载气：氮气，恒流，流速1.2ml/min； 程序升温：初始温度60℃，保持5 分钟，升温每分钟5℃至260 ℃，保持5 分钟； 质谱检测器条件：电离电压70ev，离子源温度：230 ℃，传输线温度：280 ℃，溶 剂延迟6min ；扫描离子范围：33～350amu，使用NIST 谱库进行图谱检索。 3 结果与分析 3.1 提取条件的选择 对不同密度的有机萃取溶剂、内标物、冷凝水的温度以及烟末的用量等因素 进行了选择，研究表明，有机相采用二氯甲烷略好于乙醚，能提取的物质相对较 多，冷凝水温度2 ℃基本能达到冷凝效果。分别收集微量同时蒸馏萃取前3 小时、 3～4 小时、4～5 小时和5～6 小时的有机相进行气相色谱分析显示5 小时后继续 收集的样品除少量新植二烯外基本无其他目标物质。 图三 提取溶液的气质联用总离子流图 3.2 重复性试验 按选定的微量同时蒸馏萃取条件，取4 组10.0g 烟叶样品进行重复性实验， 所得的气质联用总离子流图见图三，茄酮、降茄二酮、香叶基丙酮的校正