HPLC荧光检测器检测原生乳中的黄曲霉毒素M1（012972_CHN_01）.pdf

应 用 文 献 Liquid Chromatography Author Wilhad M Reuter PerkinElmer, Inc. Shelton, CT HPLC- 荧光检测器检 序言 测原生乳中的黄曲霉 黄曲霉毒素B1 是被任为最具致癌性/ 遗传毒 性的，由黄曲菌菌株产生的毒素。曲霉属真 毒素M 1 菌，寄生曲霉真菌在食物，农作物或是收割 的庄稼暴露在潮湿或温暖的温度下产生的。 当被乳牛吞咽下后，黄曲霉毒素B1 被转化成黄曲霉毒素M1，虽然该毒素 没有B1 毒性强，但已经有事实表明在某些动物体内可以引起肝癌。 毒素在奶牛吃草/ 进食期间毒素易被吸收和浓缩，因此牛奶是特别容易受 到黄曲霉毒素污染的。出于这种考虑，M1 被认为是在牛奶中预期发现的 主要的黄曲霉毒素，欧盟也相应地建立了牛奶中M1 应急控制限度，限度 为0.05 ppb。这是目前全球范围内就该检测项目而言控制最为严格的，比 美国食药监局的0.5 ppb 的限制还要低。 为了从分析层面上达到欧盟对M1 毒素非常低的控制限度，高效液相色谱 仪HPLC 配有荧光检测器 （FL）是首选的检测设备。使用这样的检测技术， 以下描述了高效液相色谱来检测原料乳中ppb/ ppt 浓度水平的黄曲霉毒素 M1 的方法，使用简单的免疫亲和固相萃取法 （SPE）对原料样品进行制样 / 净化。虽然在本文中关注的是黄曲霉毒素M1，但在标准品和加标回收实 验中都有黄曲霉毒素B1，B2 ，G1 和G2 ，这也是为了确认M1 毒素和其他 毒素色谱分离的效果。 实验 水从而被稀释10 倍，振动离心管使其混匀。同样将新制 硬件/ 软件 成的样品再次涡旋 1min ，然后在离心机5500 rpm 转速 一套 PerkinElmer Altus® 高效液相色谱，其 中包含 下离心 10 min。每20 mL 一份的脱脂上清液被装入3mL A-10 进样/ 溶剂管理模块，柱温箱和A-10 荧光检测器 黄曲霉毒素M1 免疫亲和柱中，以每秒 1 滴的速度进行 （PerkinElmer ，Shelton ，CT ，USA ）。一根PerkinElmer 洗脱，不要让亲和柱的填料变干。一旦柱子变干对吸附 Brownlee C18 色谱柱3um, 4.6 ×100 mm 用于所有分析 和解析的效果都会有影响的。随后