甘油冷冻保藏法.docxVIP

甘油冷冻保藏法本方法适合于中、长期菌种保藏，保藏时间一般为2-4 年左右。 用火焰灭菌的接种环取斜面菌种在平皿上划线分离单菌落。 平皿倒置于 30℃或 37℃恒温培养箱，培养 24-48 小时，至单菌落的大小为 3mm 左右。 挑取一个单菌落，接种于一个装 50mL 的 300mL 三角瓶中 30℃或 37℃振荡培养 10-15 小时，至菌密度 OD600 为 1.0-1.5。 用火焰灭菌的接种环取少量种子液，涂片后，作革兰氏染色，在显微镜下观察菌体的形态，及是否有杂菌。 按 30%甘油：种子液为 1：1（V/V）的量加入无菌甘油， 混合后分装至事先灭菌的菌种保存管（1-2mL/管）， -70℃或液氮保存。 冷冻干燥保藏法 准备安瓿管用于冷冻干燥菌种保藏的安瓿管宜采用中性玻璃制造，形状可用长颈球形底的，亦称泪滴型安瓿 管，大小要求外径 6-7.5mm，长 105mm，球部直径 9-11mm，壁厚 0.6-1.2mm。也可用没有球部的管状安瓿管。塞好棉塞，1.05kg/cm2，121.3℃灭菌 30 分钟，备用。 准备菌种，用冷冻干燥法保藏的菌种，其保藏期可达数年至十数年，为了在许多年后不出差错，故所用菌种 要特别注意其纯度，即不能有杂菌污染，然后在最适培养基中用最适温度培养，使培养出良好的培养物。细菌和酵母 的菌龄要求超过对数生长期，若用对数生长期的菌种进行保藏，其存活率反而降低