讲稿8-蛋白质分析技术.pdfVIP

第八章 蛋白质分析技术 第一节 蛋白质的鉴定 一、蛋白质含量与纯度检测 ●蛋白质的检查、测定及分析工作： 蛋白质总量、特定蛋白质的含量、鉴定、纯度。 方法：凯氏定氮法、双缩脲法、Folin—酚法 紫外吸收法等。 ●特定蛋白质→→→用高度特异性的生物学方法： 具有酶或激素性质的蛋白质→→→利用酶或激素活性测定含量。 利用抗体—抗原反应→→→测定特定蛋白质的含量。 名词：提纯程度 特定蛋白成分与总蛋白之比。 名词：比活性 每毫克蛋白质含多少活性单位。 ●纯度鉴定：用分辨率高的物理化学方法， 如电泳分析、沉淀分析、扩散分析等。 恒溶解度法 ◤纯蛋白质在一定溶剂系统中具有恒定的溶解度，而不依赖存在于溶液中未溶解固体的数量。 ◤在严格规定的条件下，以加入的固体蛋白质对溶解的蛋白质作图。 ◤如果蛋白质制品是纯的，那么溶解度曲线只呈现一个折点，在折点以前，直线的斜率为1，在折点以 后，斜率为零。 ◤不纯的蛋白质的溶解度曲线常常呈现两个以上的折点。 任何单一鉴定只能认为是蛋白质分子均一性的必要条件 而不是充分条件 Why? 很少有蛋白质能够全部满足各种鉴定的严格要求， 在一种鉴定中表现为均一的蛋白质， --在另一种鉴定中又表现为不均一的了。 二、分子量测定 蛋白质相对分子质量： MW 6 000 ～1 000 000 或更大一些。