某些特殊生理生化试验..pdfVIP

细菌鉴定中的某些特殊生理生化试验 (一)糖类发酵试验 细菌发酵葡萄糖、乳糖醇、糖苷等后，能产生各种有机酸（乙酸、丙酸、乳酸等） 及各种气体如H 、CO 等，当然不同种细菌所产生的有机酸与气体类型是不一样的。 2 2 酸的产生可用指示剂来指示。在配制糖发酵培养基时，预先加入了溴甲酚紫（PH6.8 以上时呈紫色，PH5.2 以下时呈黄色）。当细菌发酵糖而产生酸时，会使培养液由原来 的紫色变为黄色。 气体的产生可用糖发酵管中倒立的杜汉氏小管充满气体而加以证明。凡产酸、产气 用“○”表示，只产酸不产气用“＋”表示，不产气用“—”表示。 (二)M ·R试验（甲基红试验） 某些细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸，而丙酮酸再被分解为甲酸、乙 酸、乳酸等。 酸的产生可由加入甲基红指示剂的变色而指示，有效PH范围为4.2～6.3，细菌分 解葡萄糖产酸，则培养液由原来的橘黄色变为红色，此为M ·R正反应，用“＋”表示。 (三)V ·P试验（乙酰甲基甲醇试验） 某些细菌在糖代谢的过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸脱羧后，生成活性乙 醛，后者再同丙酮酸或乙醛化合产生中性的乙酰甲基甲醇。乙酰甲基甲醇在碱性条件下， 被空气中的氧气氧化为二乙酰,二乙酰与蛋白胨中的精氨酸的胍基起作用，生成红色化 合物，此即为V ·P正反应，用“＋”表示。 当在试管中加入α－萘酚时，可以促进反应的出现。加入40%氢氧化钾和等量5% α－萘酚试剂12～20滴,振荡,37℃保温20～30分钟。 (四)硝酸盐还原试验 某些细菌能把培养基中的硝酸盐还原为亚硝酸盐，氨和氮等。 如果细菌能把培养基中的硝酸盐还原为亚硝酸盐，当培养基中加入亚硝酸试剂时， 则溶液呈现粉红色或红色。此时即为硝酸盐还原试验阳性反应，为正反应，用“＋”表 示。 阴性反应的原因有两种可能： 1)细菌不能还原硝酸盐，则培养后的培养液中仍有硝酸盐存在。 2)亚硝酸盐继续分解生产氨和氮，则培养液中不应该有硝酸盐存在。 1 以上两种情况究竟属于哪一种，可用锌粉加以证明，如有硝酸盐存在，当向溶液加 入锌粉后（锌是还原剂，将5价N变为3价N 即把硝酸盐还原为亚硝酸盐）再加亚硝 酸试剂，如溶液呈红色，说明硝酸盐未被利用，为负反应；相反地，硝酸盐不存在，则 不呈红色，说明硝酸盐已被还原，为正反应。 (五)吲哚试验 某些细菌能够分解培养基内蛋白胨中的色氨酸，产生吲哚。吲哚与对二甲基氨基苯 甲醛结合，形成玫瑰吲哚，此为红色物质。即为正反应，用“＋”表示。 结果观察：在培养液中加入乙醚约1ml左右 （使呈明显的乙醚层）充分振荡使吲哚 溶于乙醚中，静止片刻，使乙醚层浮于培养基的上面，这时沿管壁慢慢加入吲哚试剂约 10 滴，如吲哚存在，则乙醚层呈现玫瑰红色（加入试剂后不可摇动，否则被混合，红 色不明显）。 ( )H S产生试验2 某些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸（如甲硫氨酸及胱氨酸）生成H S，如在配 2 培养基时，预先加入柠檬酸铁氨，则二者化合产生黑褐色的硫化铁沉淀，即为正反应， 用“＋”表示。 (七)明胶液化试验 某些细菌分泌蛋白酶（胞外酶），能分解明胶（动物蛋白）产生小分子物质。如果 细菌具有分解明胶的能力，则培养后的培养基可由原来的固体形状变为液化形状，即为 正反应，用“＋”表示。 (八)淀粉水解试验 某些细菌可以产生能水解培养基中淀粉的淀粉酶（胞外酶），它能使淀粉水解为麦 芽糖或葡萄糖。 淀粉水解后，遇碘不变蓝色，如果在菌体周围出现无色透明圈，说明淀粉被水解， 即为正反应，用“＋”表示。透明圈的大小说明水解淀粉能力的大小。 (九)油脂水解试验 某些细菌可以产生脂肪酶 （胞外酶），它能分解培养基中的脂肪成为甘油及脂肪酸， 这是促使含油多的食物变坏的原因之一。油脂被分解的检验可通过在配制油脂培养基 时，预先加入中性红指示剂（在中性时呈黄色，而在酸性时呈红色），当细菌分解脂肪 产生脂肪酸时，则培养基中出现红色斑点，即为正反应，用“＋”表示。