大肠杆菌感受态细胞制备及转化.pptVIP

大肠杆菌感受态细胞制备及转化 细胞：是一切生物的形态结构和功能活动的基本单位；是构成生物有机体的基本结构单位；是代谢与功能的基本单位；是生物有机体生长发育的基本单位；是遗传的基本单位。 实验目的 掌握制备和保存大肠杆菌感受态细胞的方法 掌握转化的方法技术 了解转化过程中各因素对转化率的影响 细胞：是一切生物的形态结构和功能活动的基本单位；是构成生物有机体的基本结构单位；是代谢与功能的基本单位；是生物有机体生长发育的基本单位；是遗传的基本单位。 感受态及转化实验原理 定义 感受态（Competence)：细菌处于容易吸收外源DNA 的状态 转化（transformation)：异源DNA分子导入受体细胞的过程 致敏过程: 用理化方法诱导细胞进入感受态的操作 吸收：食物经过消化后形成的小分子物质,以及维生素、无机盐和水通过消化道粘膜上皮细胞进入血液和淋巴的过程。 在生长周期的任何时刻自动产生感受态；（e.g. 枯草杆菌） 在生长周期的特定时刻产生感受态；（e.g .大肠杆菌） 细菌产生感受态的类型 受体菌与质粒的选择 受体菌： E.Coli DH5α：无Ap抗性 外源质粒 Ampr抗性基因编码一种周质酶（β-内酰胺酶）可特异地切割Amp的β-内酰胺环，从而使其失去杀菌能力 选择: 如进行蓝白斑筛选时