(SOP-QC-007-01)_Bradford法检测蛋白质含量标准操作规程.docxVIP

标准操作规程 StandardOperationProcedure 吉林大学研发中心 Bradford法测蛋白质含量标准操作规程 编号SOP-QC-007-01 Bradford法检测蛋白质含量 1.试剂与水： 所有试剂为分析纯（AR）；水为蒸馏水或超纯水。 2.器皿与耗品：所有玻璃器皿为清洁级，37度烤干。 tube、tip：—次性使用，容量瓶，96孔酶标板， 3.仪器设备： 酶标仪：旋涡混匀器。 4.溶液的配置： G250储存液：95%无水乙醇：100ml 88%磷酸：200ml 考马斯量兰G250：350mg 室温下可长期保存，稳定。 G250工作液：双蒸水：425ml 95%无水乙醇：15ml 88%磷酸：30ml G250储存液：30ml 可根据体积相应缩小比例配制，用1号滤纸过滤并保存于室温棕色瓶中，可使用数周。 6.3牛血清白蛋白标准品BSA（实验室购买）.配制标准品标准程序： 将牛血清白蛋白配制成lmg/m1,取牛血清白蛋白lOOmg，先用超纯水溶解，待其溶解后定容到一个洁净的100ml容量瓶中，300ul分装，保存于-20度，使用时，将其稀释至200ug/ml,配制标准品备用。 标准品的鉴定 用原有的标准品做标准曲线，随机取三支本分装品为样品，测定样品蛋白含量，得X土SD（其中X单位为ug/ml）与RSD,当X值为98-102，且RSD值小于等于2%者，认为该标准品的标示浓度为200ug/ml。l 标准操作规程 StandardOperationProcedure 吉林大学研发中心 Bradford法测蛋白质含量标准操作规程 编号SOP-QC-007-01 5.程序： 5.1.样品的处理 一次检测过程包括标准不能超过20个样品。若是原液或成品,每个样品需做2个或3个稀释度： V厂V原（dT） 其中V水为需要加入纯化水的体积，V原为稀释前样品的体积，d为稀释度水原 待测样品如为冻干品，则根据标示量稀释至lmg/m1,再稀释10倍；待测样品如为未知浓度的样品，可以根据bradford标准品颜色目测后稀释样品。 待测样品均需溶解后先离心，再进行稀释和检测操作。 稀释后的样品需做同样的三个反应体系。 标准曲线的制备（见9.5工作标准品的配制） 管号 1 2 3 4 5 6 配制工作标准品浓度（ug/ml） 200 160 120 80 40 0 200ug/m1标准品加入量（ul） 200 160 120 80 40 0 ddH2O加入量（ul） 0 40 80 120 160 200 5.3.测定步骤（操作温度不能高于室温，每2个加样时间间隔均匀，为15秒） 步骤 内容 标记管号 1 2 3 4 5 6 N 工作标准品浓度（ug/ml） 200 160 120 80 40 0 一 加入工作标准品 10ul 加入稀释后样品（ul） 10ul 一 加入G250工作液 125ul 混匀，室温静置2-3分钟 5.4.使用酶标板测OD值 每管样品（包括标准品）取lOul加在酶标板上，然后没孔加入125U1G250工作液，做 三复孔，使用酶标仪检测578nm比色波长（单波长），并计算得出蛋白浓度数值。酶 标准操作规程 StandardOperationProcedure 吉林大学研发中心 Bradford法测蛋白质含量标准操作规程 编号SOP-QC-007-01 标仪的使用及设置参见《酶标仪使用标准操作规程》 剩余样品处理 若为发酵样品或蛋白样品，稀释后的样品应保存于4°冰箱一天 反应后的样品测完后可以直接丢弃。 结果计算与分析： 7.1.结果判定标准 标准曲线的相关系数均r值（诈0.99）；若是rV0.99的话，实验需要重新做； 同一样品，同一稀释度，若是三个不同的反应体系得出结果RSDN10的话，也需要重新检测。 若是样品分不同稀释度得出的结果RSDN10的话，也需要重新检测。 数据的取舍标准。 选择所测蛋白浓度的平均数乘以纯度为本次蛋白的浓度。 8.注意事项： 所用的tip管要保证洁净与干燥 务必保证标准蛋白浓度配制，和样品稀释的准确性， 样品一定要在反应后1h内全部测完。