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胡萝卜素含量的测定精会计学第1页/共10页1、实验目的1、理解高效液相色谱法的目的和意义； 2、理解和掌握高效液相色谱法的原理和方法；3、掌握高效液相色谱仪的操作。2、实验原理第2页/共10页高效液相色谱仪的组成与工作主要流程如下图所示：第3页/共10页β-胡萝卜素含量测定原理 β-胡萝卜素为脂溶性维生素A的前体，存在于各种动植物体内，可以直接用有机溶剂提取后进行检测，然后利用反相色谱法分析。 第4页/共10页3、. 实验仪器和材料 仪器： 高效液相色谱仪 紫外检测器等。试剂材料：β-胡萝卜素； 乙酸乙酯； 正己烷； 色谱甲醇； 新鲜胡萝卜。第5页/共10页4、实验操作步骤：（1）标准溶液的配制：精确称取100mg的含量为30%的β-胡萝卜素标准品用乙酸乙酯溶解定容到100mL的棕色容量瓶中。进样时取1ml，稀释定容到100ml。（2）样品的制备：取样品，捣碎成浆状，称取10g，加甲醇、正己烷各10ml研磨。过滤后，滤液以及用乙酸乙酯洗涤渣的滤液一并接收在三角瓶中，提取液放入100ml棕色容量瓶中，乙酸乙酯定容到100ml。色谱条件第6页/共10页色谱柱：C18柱；流动相：甲醇；流速：1.5ml/min；紫外检测波长：440nm；进样量：20微升。样品进样前需要用0.45微米的滤膜过滤，装入进样瓶中。5、实验结果和计算第7页/共10页HPLC外标法定量式中 m：10g(mL)样品中β-胡萝卜素含量（mg）；m1：标样进样体积中β-胡萝卜素含量（mg）；m2：样品称样质量（g或mL）；A1：标样峰面积值；A2：样品峰面积；V1：样品进样质量（μL）；V2：样品定容体积（mL）。实验注意事项第8页/共10页1、样品的预处理；2、流动相的过滤脱气处理；3、色谱条件的选择。第9页/共10页思考题：1、高效液相色谱仪的组成与工作主要流程？2、高效液相色谱的特点？3、进行高效液相色谱仪检测β-胡萝卜素时要对待测样品进行哪些预处理？4、色谱图中β-胡萝卜素吸收峰峰高、峰面积与样品中β-胡萝卜素浓度和纯度有何关系？
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