植物基因克隆方法.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * 1、差异杂交筛选（differential hybridization screening） 2、mRNA 差异显示( differential display) 3、DNA 表达文库（expression library） 4、 DNA 结合蛋白基因的分离 5、信号传递蛋白基因的分离 6、图位克隆技术（Map-based cloning） 第三十一页，共四十七页，2022年，8月28日 酵母双杂交体系 酵母双杂交体系(yeast - two hybrid system, Y2H)是上一世纪九十年代初期在转录因子结构基础上发展起来的一种敏感的检测蛋白质-蛋白质相互作用的方法，亦即是体内鉴定基因的方法。 它不仅可有效地用来分离能与一种已知的靶蛋白(target protein)相互作用的另一种蛋白质及其编码基因， 而且可以用来确定蛋白质相互作用的特异性结构域及其氨基酸序列。 第三十二页，共四十七页，2022年，8月28日 方法 构建两种E.coli-Yeast穿梭质粒载体 : 已知基因与BD序列融合表达融合的蛋白质叫做诱饵蛋白质(Bait protein) 第一种质粒载体又叫做诱饵质粒载体或DNA-BD质粒载体(具Trp基因) 。 第三十三页，共四十七页，2022年，8月28日 第二种质粒载体又