植物花粉和花药培养.pptVIP

一、花药培养 1、取材 镜检，根据花粉的发育时期，选取大小适宜的花蕾。 2、消毒 70％酒精擦洗花蕾表面，或70％酒精浸泡30-60s后在1％次氯酸钠溶液中浸泡10-20min或在0.1％的氯化汞溶液中消毒3-10min，无菌水冲洗3-5次。 3、培养 固体或液体培养基均可。先进行脱分化培养，至小孢子大量分裂形成胚或愈伤，并突破花药壁表面，形成突出物（2-3周）；后转入分化培养基培养，形成小植株。 第三十一页，共七十八页，2022年，8月28日 二、花粉培养 (一)花粉的分离与纯化 1、自然散落法(漂浮培养散落小孢子收集法) 将花药接种在预处理液或液体培养基上，待花粉自动散落后，收集培养。 2、挤压法 在烧杯或研钵中挤压花药，将花粉挤出后收集培养。 第三十二页，共七十八页，2022年，8月28日 1）磁搅拌法 用磁力搅拌器搅拌培养液中的花药，使花粉游离出来； 2）超速旋切法 通过搅拌器中的高速旋转刀具破碎花蕾、穗子、花药，使小孢子游离出来（此法应用最广）。 4、小孢子纯化 对上述方法获得的小孢子混合物进行分级过筛、梯度离心处理纯化小孢子 3、机械游离 第三十三页，共七十八页，2022年，8月28日 梯度离心前 （小孢子形态、活力不一致） 30%蔗糖梯度离心后 （获得均一