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肿瘤精准靶向治疗会计学2. 肿瘤个体化治疗发展趋势肿瘤分子诊断1.肿瘤个体化治疗第1页/共50页循环肿瘤细胞第2页/共50页临床上治疗肿瘤的方法患者对药物是否敏感？毒性是否可耐受？患者治疗后转移复发风险有多高？第3页/共50页个体化治疗：医学概念。应用它不仅降低并发症的发生,还降低医疗费用。肿瘤标准化治疗Ⅰ期患者：手术/化疗Ⅲ、Ⅳ期患者：放/化疗+手术局部晚期患者：手术、化疗、放疗、靶向病理分型肿瘤个体化治疗标本→基因检测→遗传特性→选择化疗/靶向药物分子分型第4页/共50页第5页/共50页克唑替尼的靶标——EML4-ALK融合基因EML4和ALK两个基因分别位于人类2号染色体的p21和p23带已发现并确认至少9种EML4-ALK融合基因的突变体：v1、v2、v3a、v3b、v4、v5a、v5b、v6、v7检测方法：RT-PCR, FISH, PCR-测序等第6页/共50页靶向EGFR的抗肿瘤药物类别一：小分子酪氨酸激酶抑制剂（ EGFR －TKI) 作用机制：抑制EGFR胞内区酪氨酸激酶活性，阻断EGFR信号通路； 药物代表：吉非替尼（阿斯利康）；厄罗替尼（罗氏）。类别二：单克隆抗体(mAb) 作用机制：与EGFR胞外区结合，阻断配体与EGFR的结合； 药物代表：西妥昔（默克）；贝伐单抗（罗氏）。第7页/共50页基因EGFR热点突变位点EGFR主要突变在：外显子18，19，20，21耐药突变：T790M野生型突变型第8页/共50页靶向药物西妥昔单抗靶标——K-ras基因检测NCCN明确指出西妥昔单抗（爱必妥）用药之前须检测K-ras基因突变检测；K-ras突变型患者并不能从抗EGFR治疗（爱必妥）中获益,反而徒增不良反应危险和治疗费用；中国人群中K-ras基因突变率15% ！15%的病人不应该使用爱必妥！World J Gastroenterol. 2011 November 21; 17(43): 4779-4786. 第9页/共50页基因KRAS热点突变位点KRAS主要突变在：外显子2（密码子12，13 ），3（密码子61）第10页/共50页第11页/共50页个体化检测平台第12页/共50页基因突变检测——ARMS技术，测序等第13页/共50页ARMS技术——普通PCR等位基因特异性扩增法（Allele Specific Amplification，ASA）建立于1989年，是PCR技术应用的发展，也称扩增阻滞突变系统（Amplification Refractory Mutation System?，?ARMS）、等位基因特异性PCR（Allele Specific PCR，?ASPCR）等。方法：2条正向引物（针对正常DNA，突变DNA）1条反向引物2个平行的PCR反应普通PCR仪第14页/共50页TaqMan-ARMS技术TaqMan-ARMS探针技术基于实时PCR平台，结合了ARMS突变富集和Taqman-MGB特异性荧光检测两种技术。Taqman-MGB：针对SNP位点特异性扩增的探针，可区分一个碱基的突变。一个PCR体系中：1对引物，1条探针每个位点需要做至少两管PCR扩增！！！应用：对微量突变进行检测。第15页/共50页SNP位点检测应用第16页/共50页EGFR基因突变检测方法灵敏度的比较检测方法/检测灵敏度100%50%5%1%0.01%耗时费用直接测序法+++++---6h低Taqman-ARMS?++++++++++++-1.5h中等焦磷酸测序法++++++--6h中等Taqman QPCR技术+++++++/---2h中等第17页/共50页测序技术发展历程Next-Gen Sequencing（2005以后）Ion Semiconductor Sequencing（2011）Sanger Sequencing （1977） 第18页/共50页Ion Torrent半导体测序原理 第19页/共50页Ion Torrent半导体测序平台及芯片PI芯片：sequence exomes and whole transcriptomes（5Gb）第20页/共50页目前成熟的肿瘤分子靶向药物敏感性基因检测肿瘤类型靶向药物基因样本疗效佳的情况非小细胞肺癌易瑞沙（Iressa）特罗凯（Tarceva）EGFRKRAS手术/穿刺/胸腹水/血浆EGFR突变/KRAS野生 克唑替尼EML4-ALK融合手术/穿刺/胸腹水阳性胃肠间质瘤格列卫（Gleevec）C-KitPDGFRA手术/穿刺/内镜活检/血浆C-kit第11外显子突变/PDGFR突变 慢性粒细胞白血病格列卫（Gleevec）达沙替尼(Dasatinib)尼罗替尼(Nilotinib)ABL骨髓/全血无T315I突变乳腺癌拉帕替尼（Lapatinib）PI3