有机酸工艺学-其它有机酸发酵工艺-衣康酸.pptVIP

衣康酸生产菌诱变选育 生产衣康酸的微生物筛选法： （1）形态筛选法 根据以往育种工作的经验，对突变菌落的形态有针对性地筛选。 (2)指示剂显色法， 将诱变株移植在合有0.01％溴甲酚绿指示剂的琼脂平板上培养，根据透明圈直径的大小来筛选突变株。 (3)“浓缩”过滤筛选法 将经诱变的细胞悬浮液移于以衣康酸为惟一碳源的合成培养基中，30-37℃静置培养18～24h经曲层薄宣纸过滤，滤去菌丝，滤液经稀释后在琼脂平板上分离、筛选。这种方法的主要目的是筛选不能利用衣康酸的突变株，从而提高衣康酸产量。 (4)标记筛选法 有的科研人员在含1％LiCl抗性平板中筛选出优良的菌株。也有人利用单氟乙酸为乌头酸水合酶的专一性抑制剂，在单氟乙酸抗性平板中挑选出的菌落乌头酸水合酶活性较高，从而获得高产衣康酸菌种。 4、 衣康酸生产方法工艺 4.1化学合成法 美国Pfizer公司和日本电气化学公司曾经研究开发以丁二酸酐或丁二酸酯为原料，以不同的催化剂与甲醛反应生成柠康酸，在加热异构化得到衣康酸。 美国Pfizer 公司以柠檬酸为原料，在480℃汽化，喷雾进料，以负载的磷酸盐为催化剂，在290～340℃反应得到柠康酸，转化率达82%，然后加热220℃异构化得到衣康酸。 英国人Calsson等以柠檬酸为原料在250℃高温，34.5Mpa高压下反应生成衣康酸和柠康酸，反应的总选择性超过了90%。 4. 2发酵法生产 4.2.1 液体深层分批发酵工艺（1）液体深层批发酵的工艺流程 （2）液体深层发酵衣康酸中重要的工艺参数包括 培养基---碳源 初始糖浓度 氮源类型及其浓度对衣康酸发酵影响 氮源种类 氮源浓度/g.L-1 衣康酸产量/g.L-1 菌体量/g.L-1 (NH4)2SO4 1 72.4 10.5 2 78.6 11.5 3 80.4 11.4 4 82.7 11.9 5 82.0 11.8 NH4NO3 1 78.2 11.2 2 84.0 11.4 3 83.1 11.4 4 81.7 11.0 5 79.4 11.3 尿素 1 48.2 7.1 2 47.2 7.2 3 48.9 7.4 4 46.1 7.6 5 45.4 7.6 （2）液体深层发酵衣康酸中重要的工艺参数包括 温度，pH，接种量，通气与搅拌速度 温度： 土曲霉对温度极为敏感，不但会影响衣康酸的积累，而且还会导致产杂酸。 土曲霉孢子培养温度以(36±1)℃最佳；一、二级种子培养温度以36℃为宜， pH: pH对最终衣康酸的产量起着十分重要的作用。 pH在1.8以下时，土曲霉几乎不能生长和产酸； pH在4.5以上时．菌丝形成较大菌丝球．有时直径可达5～6mm，同时几乎不产酸。 在菌体生长高峰期应维持pH在3.0左右，以获得最大生长速率； 一旦进入产酸期，应控制pH在2.1～2.3范围内。 接种量 一级种子接种量保证培养液内孢子数达108～109个／mL为宜，二级种子接菌丝悬浮液12％～14％。 通气量 在生产中如果通气不足，则严重影响产酸速率及转化 风量750L罐，0.25m3/m3.h,转速80~90r/min. （2）固定化细胞发酵工艺 60年代，Kobayashi提出了固定化技术连续生产衣康酸的发酵工艺。尤其是进20年来，利用包埋法固定衣康酸生产菌的全细胞生产衣康酸技术的研究比较活跃，固定化土曲霉菌体细胞使用的载体多为聚丙烯酰胺凝胶。 1983年Horitsu等人报道了用聚丙烯酰胺凝胶固定土曲霉细胞生产衣康酸的方法，将固定化后的凝胶切成4 mm3的碎块，取40g凝胶装入和间歇发酵同样的反应柱，采用流速4ml/h，35℃通气1.4L/min 连续发酵15天后，衣康酸产生速率达到60mg/h,固定化细胞半衰期为10天。 1986年我国居乃琥等人报道了利用多孔转盘式反应器培养固定化土曲霉菌生产衣康酸的方法。使用的菌种为NRRL1960,在36℃，pH3.0，转盘转速8r/min,通气100ml/min的条件下连续发酵，流加速度在60ml/h时，衣康酸的产生速率达0.73g/L.h。 但到目前为止，固定化细胞发酵工艺生产衣康酸的技术还仅限于实验室研究，尚无工业化生产的报道 （3）补料分批发酵工艺 根据衣康酸发酵过程底物消耗速率和代谢产物合成的关系，可以找出补料发酵的规律。 例如Asp.terreus54-S-30，在200L气升式反应器中发酵，在36～65h阶段，衣康酸发酵进入产酸期，在此阶段，衣康酸的容积产率维持在2.3g／(L·h)，糖的消耗速率也恒定在3.9g／(L·h)，糖酸转化率维持在60％。 通过向培养系统中补充物料，可以使培养液底物浓度较长时间保持在一定范围，达到延长产酸期的目的。从而提高容积产率、产物浓度和得率。 4.1.5衣康酸的提取