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胃肠肿瘤基因检测会计学第1页/共56页内容提要胃癌与HER2检测结直肠癌与EGFR、KRAS检测胃肠间质瘤与C-KIT检测第2页/共56页胃癌与HER2检测第3页/共56页胃癌概述胃癌是消化系统最常见的恶性肿瘤，全世界恶性肿瘤的病死率中胃癌居第二位年龄：40-60岁；性别：男女比例约为3:1临床表现：症状：上腹隐痛、腹胀、食欲不振、恶心呕吐、呕血与黑便、贫血、体重下降体征：上腹部深压痛、肿块、左锁骨上淋巴结肿大第4页/共56页胃癌病理表现早期胃癌概念：局限于粘膜或粘膜下层，不论其有无淋巴结转移肉眼分型：表浅型、隆起型、凹陷型进展期胃癌概念：癌组织浸润到粘膜下层以下者肉眼分型：隆起型、溃疡型、浸润型组织学类型:腺癌(管状-、乳头状-、粘液-等)胃癌治疗第5页/共56页手术治疗仍然是根治胃癌的最有效方法，然而，仅有30-40％患者可能通过单纯的手术治疗而获得治愈大部分患者死于肿瘤的再发或远处转移寻求手术以外的途径治疗胃癌、预防其复发转移成为胃癌综合治疗的重点和热点晚期胃癌急需有效的治疗措施研究显示HER2阳性胃癌患者使用靶向药物赫赛汀有效第6页/共56页HER2HER：human epidermal growth factor receptor，人类表皮生长因子受体HER2，又名c-erbB-2；原癌基因，位于17q21，编码跨膜糖蛋白，具有跨膜酪氨酸激酶活性；通过参与信号传道通路的一系列活动影响细胞的增殖与分化。生长因子（配体）接合部细胞膜酪氨酸激酶活性部分信号传导至细胞核细胞浆细胞核促进细胞分裂、增殖第7页/共56页 HER2 受体跨膜二聚体的信号传导途径第8页/共56页HER2过度表达：正常状态的10-100倍正常扩增/过度表达3细胞质C2B14细胞核A细胞膜1 = - 基因拷贝数2 = - mRNA 转录3 = - 细胞表面受体蛋白表达4 = - 细胞外受体功能域释放A = HER2 DNAB = HER2 mRNAC = HER2 receptor protein第9页/共56页 HER2基因的致瘤机制：抑制凋亡，促进增殖；增加肿瘤细胞的侵袭力；促进肿瘤血管新生和淋巴管新生。 研究表明： 30％以上的人类肿瘤中存在HER2基因的扩增/ 过度表达（如乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜 癌、输卵管癌、胃癌和前列腺癌等第10页/共56页HER2在胃癌中表现大约16% 的进展期胃癌患者 HER2检测呈阳性胃癌组织的HER2过表达与肿瘤侵犯程度高和预后差密切相关；因此对于胃癌病人都要检测HER2赫赛汀是一种针对HER2阳性的胃癌患者新的靶向药物。准确的HER2 检测对判断胃癌患者接受赫赛汀治疗是否有效至关重要第11页/共56页胃癌HER2 检测流程关键步骤包括标本收集固定石蜡包埋切片脱蜡IHC / FISH 检测第12页/共56页胃癌HER2 检测流程肿瘤标本免疫组化01+2+3+FISH–+可接受赫赛汀治疗评分系统基于: Hofmann M, et al. Histopathology 2008; 52:797–805.第13页/共56页标本收集标本来源：手术或活检标本可用于HER2检测标本初步处理立即 (20–30分钟内)进行标本标记、切开、固定避开出血和坏死组织第14页/共56页标本固定标本固定不合格是HER2检测结果错误最常见的原因在最快的时间内固定标本(20分钟内)固定时间手术标本: 6–48 h (至少 1 h/mm组织)活检标本: 不长于 24 h (至少 1 h/mm组织)固定液种类10% 中性福尔马林新配制的福尔马林 (定期更新)其他试剂必须经过验证，以保证结果可靠非福尔马林制剂可能会妨碍IHC和FISH检测的可靠性第15页/共56页石蜡包埋标本用梯度乙醇/二甲苯脱水，石蜡包埋避免标本长时间置于融化的石蜡中，因为高温会减少抗原表位切片前，石蜡包埋标本可长期存放用新鲜的石蜡石蜡包埋标本最小 1 cm2以利于切片第16页/共56页切片和脱蜡切片理想的切片应该在进行HER2检测前的短时间内立即进行 切片应该在肿瘤最有代表性的部位进行，且应该有HE染色证实切片厚度可能影响结果的解读，保证切片厚度为2–4 μm将切片置于玻片上，放置于室温下 12–24 h 或 60°C 1 h 干燥脱蜡标本用二甲苯脱蜡、梯度乙醇水化确保脱蜡完全，残余石蜡会增加非特异性染色免疫组化技术第17页/共56页概念：用标记的特异性抗体对组织切片标本中某种化学成分的分布和含量进行组织原位定性、定位或定量研究。基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织内抗原，对其进行定位、定性及定量的检测 免疫组化步骤第18页/共56页对组织切片进行预处理抗原修复：微波修复、热修复等