电压钳制和膜片钳制技术 (2).pptVIP

（五）、数据采集与分析 实验中通道电流信号经膜片钳放大器放大后再经12位A/D、D/A转换器输入计算机用于电流信号采集，系统连接如下图所示： 第六十三页，共一百二十一页，2022年，8月28日 分析的内容 1、宏观电流的分析 宏观电流（macroscopical current）是指膜上许多通道同时开放形成的离子电流，是由许多单通道电流总和形成的。应用电压钳技术在单细胞或多细胞标本上记录的电流和膜片钳全细胞模式记录的电流都属宏观电流。 第六十四页，共一百二十一页，2022年，8月28日 （1）、通道的药理学特性 通道的药理学特性是通道分类的重要依据，许多通道具有特异性阻滞剂和激动剂（或开放剂）。 TTX——钠通道特异性阻滞剂， TEA——钾通道特异性阻滞剂， Cromakilin——ATP敏感钾通道特异性开放剂 利用它们可以区分膜电流的成分，有助于确认通道的种类。 第六十五页，共一百二十一页，2022年，8月28日 （2）、通道的门控特性 通道的门控性主要是指电压门控通道的激活与失活对电压和时间的依赖性。典型的电压门控通道的活动包括激活过程和失活过程。 钠通道门控的H-H模型 第六十六页，共一百二十一页，2022年，8月28日 （3）、通道的电流—电压关系 通道的电流—电压关系（current-voltage relationship, 简称I-V曲线）是反映离子通道动力学性质的重要参数,可分析通道的激活过程、反转电位、整流特性和离子选择性等。 要获得I-V曲线，需要给予连续变化的阶跃式脉冲电压。 第六十七页，共一百二十一页，2022年，8月28日 ①、通道整流特性的分析 通道I-V关系曲线与横坐标的交点是该通道电流的反转电位Vrev或称零电流电位。通道的整流特性则是指通道电流对膜电位的依赖性，通常可用I-V关系予以判断。 通道的电流电压关系曲线 第六十八页，共一百二十一页，2022年，8月28日 整流（Rectification） 电流和电压的关系不满足欧姆定律的直线关系。原因是离子通道的开放导致膜电阻迅速降低。整流现象是许多离子通道的特点。 有整流 无整流 V=IRc V=IRv 离子通道不开放时 膜的被动反应 离子通道开放时 膜的主动反应 第六十九页，共一百二十一页，2022年，8月28日 外向整流 随膜电位的去极化，I-V曲线明显向Y轴（电流轴）靠近。如IK电流。 内向整流 随膜电位的去极化，I-V曲线明显向X轴（电压轴）靠近。如烟碱电流。 IK电流的外向整流 烟碱电流的内向整流 去极化方向 去极化方向 第七十页，共一百二十一页，2022年，8月28日 ②、通道离子选择性的分析 如果通道的离子选择性很高，只能或主要通过一种离子，则Vrev应等于或接近该离子的平衡电位。如果通道通过多种离子，则可利用改变膜两侧某种离子浓度差以后的Vrev变化来判断膜电流中是否的该离子成分。例如If通道的I-V曲线随[Na]。的增高而右移，Vrev相应变正，说明If通道对钠离子有通透性。 第七十一页，共一百二十一页，2022年，8月28日 2、单通道电流的分析 （1）、通道门控动力学的分析 典型的单通道电流（single channel current）呈一种振幅相同而持续时间不等的脉冲样变化。它有两个电导水平，即0和1，分别对应关闭和开放状态。 A：豚鼠心室肌内向整流钾通道的单通道电流； B：同一膜片上通道开放（上）和关闭（下）时间频数分布直方图。 第七十二页，共一百二十一页，2022年，8月28日 （2）、单通道电导的测定 在几个不同的钳制电位下记录膜片上单通道电流，右图为得到单通道的I-V曲线，曲线斜率即单通道电导。 蛙骨骼肌细胞贴附式膜片的记录 A：不同钳制电位下记录的N2－型乙酰胆碱受体阳离子通道电流，左侧数字为膜电位（mV）。 B：单通道电流的I－V关系，膜电导32pS。 第七十三页，共一百二十一页，2022年，8月28日 I-V曲线（Current-voltage curve） 电流-电压关系曲线。可反映通道的如下动力学参数： 激活过程 阈电位 反转电位 整流特性 第七十四页，共一百二十一页，2022年，8月28日 （六）、主要仪器设备 ① 超净工作台（YJ-1450，苏州净化设备公司， China） ② 二氧化碳孵箱（1815Tc，SHEL-LAB，） ③数字式超级恒渐浴槽（HSS-1 CHENDU INSTRUMENT China） ④ 微管电极拉制器（PP-83 NARISHIGE Japan） ⑤ 微管电极