细胞工程植物原生质体培养和体细胞杂交.pptVIP

一、原生质体培养方法 类似于单细胞培养。 培养方法有三种: 液体浅层培养法 固体平板培养法 双层培养法 第三十页，共六十三页。 第三十一页，共六十三页。 双层培养法 液体-固体双层培养法：将原生质体悬液涂布在固体琼脂培养基表面。 固体-固体双层培养法：将原生质体悬液与琼脂混合，涂布在固体琼脂培养基表面。 第三十二页，共六十三页。 液体浅层培养法 方法：将原生质体悬液于培养皿中浅层静止培养。 特点：每天轻轻晃动两三次，加强通气。 当原生质体经细胞壁再生，并形成细胞团后，应立即转入固体培养基上培养，以利分化形成植株。 第三十三页，共六十三页。 二、影响原生质体培养的因素 原生质体活力 原生质体起始密度 渗透压稳定剂 培养基营养 培养条件：光照和温度 植物材料和基因型 第三十四页，共六十三页。 原生质体起始密度 常用：104~105个/ml。 浓度较高：由不同的原生质体形成的细胞团彼此交错生长在一起，形成嵌合体组织。 浓度低于103个/ml：细胞壁再生后，仅分裂1~2次，就无法继续分裂。 第三十五页，共六十三页。 渗透压稳定剂 原生质体是在高渗透压中生长，再生出细胞壁，形成细胞团后，应逐渐降低渗透压，最后转至不含渗透压剂的新鲜培养基中，才能很好地分化。 第三十六页，共六十三页。 培养基营养 原生质体培养常用：MS、B5、NT、N6、M