1.1DNA重组技术的基本工具.pptxVIP

1.1DNA重组技术的基本工具会计学第1页/共31页基因工程的概念基因工程的别名操作环境操作对象操作水平基本过程实质结果基因拼接技术或DNA重组技术生物体外基因DNA分子水平剪切→ 拼接→ 导入→ 表达基因重组人类需要的基因产物基础理论技术发明第2页/共31页基础理论和技术的发展催生了基因工程 DNA是遗传物质的证明DNA双螺旋结构和中心法则的确立遗传密码的破译基因转移载体的发现工具酶的发明DNA合成和测序技术的发明DNA体外重组的实现重组DNA表达实验的成功第一例转基因动物问世PCR技术的发明第3页/共31页 普通棉花不具有抗虫性，科学家发现苏云金芽孢杆菌能够产生一种毒蛋白，对棉铃虫有一定的杀伤作用。试设计一个简单的方案，使棉花对棉铃虫也有抵抗作用.基因工程培育抗虫棉的简要过程：苏云金芽孢杆菌普通棉花(无抗虫特性)提取拼接导入重组DNA抗虫基因棉花细胞(含抗虫基因)棉花植株(有抗虫特性)上述培育抗虫棉的关键步骤是什么？第4页/共31页基因工程培育抗虫棉的关键步骤：关键步骤一：抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来关键步骤二：抗虫基因与棉花DNA“缝合”关键步骤三：抗虫基因进入棉花细胞第5页/共31页解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？“分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶“分子缝合针”—— DNA连接酶“分子运输车”—— 基因进入受体细胞的载体第6页/共31页 第一节 DNA重组技术的基本工具第7页/共31页DNA重组技术的基本工具　基因的大小以纳米计算，要对它进行剪切、拼接等操作，没有非常精细的工具是不行的。进行基因操作最少需要以下三种工具：准确切割DNA的工具（“分子手术刀”）DNA片段的连接工具（“分子缝合针”）基因转移工具（“分子运输车”）第8页/共31页一、 “分子手术刀” ——限制性核酸内切酶第9页/共31页自主学习阅读课本4-5页“限制性核酸内切酶——分子手术刀”的相关内容，填写下表来源种类作用作用结果主要从原核生物中分离纯化而来已经分离出大约4000种1、识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列2、使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。形成两种末端：黏性末端或平末端5’1’4’2’3’第10页/共31页脱氧核苷酸的结构5’1’4’3’2’5’ G4’1’3’2’磷酸二酯键第11页/共31页3’端5’端 A3’,5’-磷酸二酯键5’端3’端限制酶的识别序列第12页/共31页限制酶所识别的序列的特点是：呈现碱基互补对称，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的 ，称为回文序列仔细观察各限制酶 识别的特定序列有何 特点？第13页/共31页EcoRI限制酶的作用大肠杆菌的一种限制酶(EcoRⅠ)只能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。在G与A之间切割中轴线第14页/共31页EcoRI限制酶的切割　黏性末端 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。黏性末端第15页/共31页SmaI限制酶的作用SmaI只能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切开。在G与C之间切割中轴线第16页/共31页SmaI限制酶的切割当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。平末端　　　平末端第17页/共31页寻根问底你能推测限制酶存在于原核生物中的作用是什么吗？为什么限制酶不剪切细菌本身的DNA？通过长期的进化，细菌中含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。这样，尽管细菌中含有某种限制酶也不会使自身的DNA被切断，并且可以防止外源DNA的入侵。 原核生物易受自然界外源DNA的入侵，但生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，以防止外来病原物的侵害。限制酶就是细菌的一种防御性工具，当外源DNA侵入时，会利用限制酶将外源DNA切割掉，以保证自身的安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA、使之失效，从而达到保护自身的目的。自主学习第18页/共31页阅读课本第5页“分子缝合针”——DNA连接酶的相关内容，填写下表功能类型来源相同点差别E·coliDNA连接酶大肠杆菌只能连接黏性末端恢复磷酸二酯键能连接黏性末端和平末端(效率较低)T4DNA连接酶T4噬菌体DNA连接酶的作用第19页/共31页把切下来的DNA片段拼接成新的DNA，即将脱氧核糖和磷酸连接起来催化形成磷酸二酯键DNA连接酶的缝合作用第20页/共31页可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，两DNA片段要具有互补的黏性末端才能拼起来注意：DNA连接酶可连接双链DNA中的DNA单链缺口，但不能