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BCA法测定蛋白质浓会计学第1页/共12页 一 实验目的 二 实验原理 三 实验材料与仪器 四 实验步骤 五 注意事项 六 思考题第2页/共12页 一 实验目的 ◆学习BCA法测定蛋白质浓度的基本 原理 ◆掌握BCA法测定蛋白质的技术第3页/共12页二 实验原理BCA (bicinchoninic acid，二辛可酸)法测定蛋白质即在碱性条件下蛋白质与Cu2+络合，并将其还原成Cu1+。Cu1+和BCA试剂反应,使其由原来的苹果绿形成稳定的紫蓝色复合物，在562 nm有强烈的光吸收，且吸光值和蛋白质浓度在广泛范围内有良好的线性关系，因此可用于蛋白质浓度测定。第4页/共12页其反应式为: 蛋白质+BCA试剂+Cu2+ →复合物 混合物由苹果绿变为紫兰色复合物BCA测定蛋白质的范围是20μg/ml~200μg/ml，微量BCAμg/ml ~10μg/ml。 此方法被科研工作者广泛选用第5页/共12页 三 实验器材与试剂1．器材: 分光光度计；恒温水浴箱；枪式移液管；试管13支；吸管2ml 1支、0.1ml 3支试剂: 试剂A；试剂B；蛋白质标准液；待测样品 四 实验步骤第6页/共12页1. 取试管13支，编号（除空白管只做1管外，其它各号测定管均重复做两管），按下表操作并记录：第7页/共12页BCA法测定蛋白质含量管号试剂(μl)空白管标准管测定管×21×22×23×24×25×2蛋白质标准液(1.5mg/ml)—20406080100—蒸馏水(ml)100８０604020——待测样品(ml)——————100BCA工作液(ml)2.02.02.02.02.02.02.0 混匀后，在３７摄氏度下保温３０ 分钟，比色测定第8页/共12页2．以蛋白质含量为横坐标，光吸收值为纵坐标绘制标准曲线3．用测定管平均光吸收值在标准曲线上查出相应的蛋白质含量，计算求出该待测血清蛋白质的含量(g/L)。4．从标准管中选择一管与测定管光吸收值相接近者，按比色法计算公式计算求出该待测血清的蛋白质浓度(g/L)。 思考题??? 第9页/共12页试比较ＢＣＡ法、双缩脲法、Lowery法的异同.为什么ＢＣＡ法常用与科研？与其他方法相比它有什么特点和优势？第10页/共12页 特点：1.操作简便快速，比经典的lowry法快4倍2.灵敏度高ug3.准确，试剂稳定性好，在20ug/ml~2000ug /ml 浓度范围内有良好的线性关系4.经济实用，可在微孔板中进行，待测样品体积为1ul~20ul，大大节约样品和试剂用量5.抗干扰能力较强，不受绝大部分样品中的去污剂、尿素等化学物质影响第11页/共12页
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