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会计学1FACSCanto流式细胞仪原理 BD公司介绍BD公司是由Maxwell W. Becton和Fairleigh S. Dickinson 于1897年在纽约创立的,总部位于美国新泽西州第1页/共79页 BD公司介绍位居财富周刊500强的大型跨国公司产品涵盖诸多医疗领域生物科学部:流式细胞仪及应用于生物科学的试剂、耗材第2页/共79页 BD公司流式细胞仪产品FACS Vantage SE-大型分选机FACS Aria-高速分选的台式机FACS Diva-高速分选的数字化大型机第3页/共79页 BD公司流式细胞仪产品FACSCount流式细胞仪FACSCalibur流式细胞仪FACSCanto II流式细胞仪第4页/共79页 BD 公司流式细胞仪产品BD FACSCanto II流式细胞仪第5页/共79页 FACSCanto II流式细胞仪原理第6页/共79页 流式细胞仪可告诉我们一个细胞的什么指标?细胞的相对大小（前向角散射光信号，FSC）细胞的相对颗粒性及内部结构的复杂性（侧向散射光信号，SSC）相关的荧光强度第7页/共79页 散射光信号的特征FSC和SSC当颗粒通过聚集的激光束时，激光向各个方向散射。与激光束方向同轴的称前向角散射光信号（FSC）。与激光束垂直的称为侧向角散色光信号（SSC）。488nm激光激发产生散射光第8页/共79页 前向角散射光信号FSC第9页/共79页 侧向角散射光信号SSC第10页/共79页 散射光信号的特征红细胞裂解的全血第11页/共79页 荧光信号的特征什么是荧光信号当荧光抗体或其他染料染色的颗粒通过激光束时，染料吸收光子跃迁到高能级，返回基态时，染料释放出能量，大部分以光的形式释放。这种发射出的光称为荧光。第12页/共79页 荧光信号的特征发射光的荧光强度与结合的位点成正比第13页/共79页 信号产生荧光信号第14页/共79页 荧光信号的特征常见荧光染料的发射波长第15页/共79页 直方图显示荧光信号第16页/共79页 点图显示荧光信号第17页/共79页 什么是流式细胞仪？在流动的状态中检测细胞各种物理及生物特征的一种仪器；Injector TipFluorescencesignalsFocused laserbeamSheath fluid第18页/共79页 流式细胞仪特点及检测标本特异性强，灵敏度高，速度快，并能实现多参数分析；可检测的样本种类多样(1)外周血，骨髓，细针穿刺，洗脱液，实体组织，培养细胞(2)血清、血浆、培养上清、细胞裂解液第19页/共79页 FACSCanto II流式细胞仪系统组成流式细胞仪液流车工作站第20页/共79页 FACSCanto简介配置空冷激光两根激光:488nm、633nm、光路固定，无需调校液流系统信号检测系统八角形和三角形光学收集系统，将光信号转换成电信号电子系统将电信号转换成数字化信号第21页/共79页 液流系统流动室鞘液工作液，可选PBS、血球稀释液或蒸馏水。样本流单细胞悬液，浓度5?105?1 ?106/mL第22页/共79页 液流系统鞘液是压力驱动的。在压力作用下，鞘液经过滤器进入流动室下部的小室中。检测的样本在压力的作用下，也进入流动室下部的小室中，样本压力略大于鞘液的压力。在鞘液的包裹下，样本由下向上通过流动室，经激光激发后，样本中的颗粒被检测。第23页/共79页 液流系统 -FLOW CELL(流动室)Injector Tip荧光信号聚焦的激光光束鞘液第24页/共79页 液流系统第25页/共79页 液流系统-样本流速第26页/共79页 样本流速的选择高流速：一般用于定性分析，如免疫分型。采集速度快,但分辨率低.低流速：一般用于对分辨率要求较高的分析，如DNA分析。第27页/共79页 光学系统第28页/共79页 光学系统染色的细胞或其他颗粒通过聚焦的激光束时，会散射激光或荧光。因为激光束是一个小斑点，颗粒快速通过流动室，散射光或荧光持续的时间非常短-只有几微秒。这些短暂的光信号被收集、过滤然后被检测器转换成电信号。第29页/共79页 信号采集系统激光488nm，633nm，激发样本中的颗粒或细胞产生散射光信号和荧光信号信号检测组件-八角形和三角形光学滤片将激光激发后产生的散射光信号和荧光信号引导至相应的PMTPMT-将光信号转换成电信号第30页/共79页 常用荧光染料的特性荧光染料 激发波长 (nm) 发射波长(nm) 用途 颜色FITC 488 525 免疫荧光 绿色PE(RD1) 488 575