Hela细胞的传代培养.pptxVIP

Hela细胞的传代培养会计学第1页/共17页教学目标细胞传代培养的操作 第2页/共17页细胞传代培养的概念概念：指细胞从一个培养瓶以1:2或其他比率转移，接种到另外的培养瓶中的培养，也叫做继代培养。 HeLa细胞是一种贴壁生长的细胞，在进行传代时通常是采用胰蛋白酶消化，把细胞分散成单细胞再传代。 第3页/共17页培养细胞一代生长过程第4页/共17页实验前准备1、材料： HeLa细胞 2、试剂： 0.25％胰蛋白酶、1640培养基（含10％ 小牛血清）、PBS 第5页/共17页实验前准备3.仪器设备CO2培养箱倒置显微镜超净工作台第6页/共17页实验前准备3.仪器设备离心机恒温水浴锅第7页/共17页实验前准备3.仪器设备 培养瓶，移液管，酒精灯，酒精棉球，试管架，记号笔等。第8页/共17页实验前准备4.实验前准备工作 （1）细胞培养用的器材和试剂灭菌； （2）超净工作台准备（75%酒精擦拭台面，紫外灯照射30min）； （3） 试剂预热（37℃水浴锅）； （4）操作人员准备 （75%酒精擦拭双手等）。细胞生存环境：无菌、无毒第9页/共17页细胞传代操作 1、倒去培养瓶中的旧培养液，加入2-3mL预热的PBS液，轻轻振荡漂洗细胞，以除去悬浮在细胞表面的碎片。吸除培养液第10页/共17页细胞传代操作 2、胰蛋白酶消化：加入适量0.25％胰蛋白酶消化液，37℃消化，注意消化液的量以盖住细胞最好。 加消化液第11页/共17页细胞传代操作 3、盖紧瓶盖，放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移，原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时将消化液弃去，加入适量预热后的培养液终止消化。（一般消化时间约为2-3分钟）。 消化后细胞（适度状态）吸除消化液消化前细胞第12页/共17页细胞传代操作 4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液。吹打成细胞悬液第13页/共17页细胞传代操作? 5、以1：2或1：3进行分装，补充新鲜培养基，并在培养瓶上做好标记，注明代号、日期，轻轻摇匀，置于37℃ CO2培养箱培养（如果瓶盖不带通气孔，则需将瓶盖旋开半圈）。24h后即可对细胞的生长情况进行观察记录。当细胞长成单层后即可用于接种或冻存。分装第14页/共17页实验操作注意事项1.用电安全 3.及时规范记录第15页/共17页HeLa细胞传代培养实验原理 细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。 传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。贴壁细胞需经消化后才能分瓶。 第16页/共17页Thankyou传代培养，使细胞维持在对数生长期，可最大程度地增加实验所需的健康细胞数。