乳酸菌的分离培养.pdf

- 乳酸菌的分离培养 保加利亚乳杆菌 组长： 组员： 实验目的：1.学习并掌握普通光学显微镜油镜的使用技术及微生物形态观察； 2. 学习微生物制片、染色的基本技术，掌握乳酸菌的简单染色法及无菌操作接种技术； 3.通过对培养基的配制，了解配制培养基的一般步骤和方法，掌握微生物实验常用的器皿的清洗与包扎、 培养基的制备、消毒灭菌。 4. 了解各种灭菌的基本原理和应用* 围，以及实验室中常用的灭菌方法。 5. 了解酸奶中乳酸菌分离原理, 观察乳酸菌的基本形态, 掌握用显微镜测微尺测量微生物细胞大小、数目 的测定的方法。 6. 了解稀释平板计数的原理，熟练掌握混合平板培养法。明确显微镜计数的原理并学习使用血球计数板 进行微生物计数的方法。 7 ．初步学会乳酸菌培养的基本技术，了解并掌握细菌鉴定中常用生理生化反应的原理和方法，掌握进 行微生物大分子水解试验的原理和方法。 8. 了解并掌握微生物菌种保藏的常用方法及其优缺点 ，并了解不同微生物对 不同的生物大分子的分解利 用情况，认识微生物代谢类型 的多样性。 实验原理： 乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称，本实验中 用革兰氏染色法进行染色，革兰氏染色法是根据细菌细胞壁成分不同,脱 色效果不同从而可以将细菌 区分 为 G+和 G- 菌。通过革兰氏染色以及形态学观察，乳酸菌呈紫色，为革兰氏阳性菌；乳酸菌应为乳杆菌 和乳球菌的混合体。酸奶中含有乳酸菌，而且 目前市场上销售的酸奶中通常含有双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、 嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌四种菌。细菌及其 它一些微生物的大小，通常用测微计 来测量，测微计分 接目测微计与镜 台测微计；培养基是按照微生物生长发育的需要，用不同组份 的营养物质调制而成的营 养基质 ；灭菌是用物理或化学的方法 来杀死或除去物品上或环境中的所有微生物，包括芽孢 ； 自然条件 下，微生物常以群落状态存在 ，这种群落往往是不同种类微生物的混合体 ，为 了研究*种微生物的特性或 者要 大量培养或者使用*种微生物，必须从这些混杂的微生物群落 中获得纯培养，这些获得纯培养的方法 称为微生物的分离和 纯化。用生化试验的方法检测细菌对各种基质 的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别 细菌的种属 ，称之为细菌的生化反应。 实验器材 ： 样品 ：含乳酸菌的酸奶 ① 培养基：改良 MRS 固体培养基 蛋白胨 5g 牛肉膏 5g 酵母提取物 2.5g 柠檬酸二铵 1g 水 500mL 乙酸钠 2.5gK2HPO41gMnSO4 ·4H2O 0.125 吐温 80 0.5mL 琼脂 12.5gMgSO4 ·7H2O0.29gCaCO3 5g 葡萄糖 10g。 仪 器用品： 500ml 烧杯一个 100ml 量筒一个 无菌培养皿 12 个 . z. - 250ml 容量三角瓶 2 个 5ml 无菌移液管 1ml 无菌移液管 6 只 15ml 试管 7 只高压灭菌锅天平 水浴锅一个玻棒一根旋涡均匀器一台镜台测微尺 电磁炉一个棉花纱布目镜测微尺 牛皮纸麻绳接种环一个盖玻片 酒精灯一盏牛角匙 pH 试纸血球计数板 载玻片若干恒温培养箱酸度计擦镜纸、吸水纸 液体石蜡显微镜载玻片玻片架、洗瓶、酒精灯 火柴、滴管 药品：结晶紫，乙醇，草酸铵，碘，碘化钾，番红，KOH ，NaCl ，10％NaOH ，2% 氯化铁。 药品配制 结晶紫 ：结晶紫乙醇饱和液（结晶紫2g 溶于 20ml 95% 乙醇中）20ml ，1g 草酸铵于蒸馏水 100ml。将两液 混匀即成。 卢戈氏碘液 ：碘 1g ，碘化钾 2g ，蒸馏水 300ml 。先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，然后加入碘使之完全溶 解 ，再加入蒸馏水 300ml 即成。 蕃红溶液：番红 2.5g ，95% 乙醇 100ml ，溶解后存于密闭的棕色瓶中。用时取 10ml 与 80ml 蒸馏水混匀即 可。 0.1% 的吕氏美蓝染液：A 液：美蓝 0.3g ，95% 乙醇300ml ；B 液：0.01% KOH 100ml 。混合 A 和 B 液即成， 按 1 ：100 稀释即可。 生理盐水：称取