凝胶DNA回收试剂盒说明书.pdfVIP

凝胶DNA回收试剂盒说明书 产品组成 凝胶DNA回收试剂盒 5次样品 50次制备 250次制备 Cat. No. 核酸纯化柱 5个 50个 50个×5 2 ml离心管 5个 50个 50个×5 1.5 ml离心管 5个 50个 50个×5 Buffer G 3 ml 30 ml 150 ml Buffer WS 3 ml 30 ml 150 ml Buffer WG （浓缩液） 2.4 ml 24 ml 72 ml ×2 Buffer TE 0.5 ml 5 ml 25 ml 说明书 1份 1份 1份 产品储存与有效期 产品如果储存于室温（15~25℃），可在两年内保持使用性能无明显变化；如果将产品储存于2~8℃ ，可 延长产品的有效期至两年以上。 技术支持 杭州新景生物试剂开发有限公司研发部：e-mail: , 电话：400-0099-857。 产品介绍 本试剂盒采用了柱纯化的原理，适合从多至400mg琼脂糖凝胶中回收DNA （70bp-10kb），回收率为70 ～ 85%。溶胶试剂为不含碘化钠的温和溶解液，确保回收的DNA保持片断完整性和高生物学活性，回收的 DNA可直接用于连接、体外转录、PCR扩增、测序、微注射等分子生物学实验。 用户需自备的试剂与物品 1．无水乙醇 2 ．1.5ml离心管、移液器及吸头 3 ．一次性手套、纸巾及防护用品 4 ．台式小量离心机（可配离心1.5ml离心管和2ml离心管的转子） 使用前准备 1）如果离心机有制冷功能，请将温度设置到25℃。 2）根据试剂瓶标签上的指示在Buffer WG中加入无水乙醇，并在标签的方框中打勾作好“乙醇已加”的标 记。 3）将水浴锅的温度设置为50°C。 4）可能需要使用3 M 醋酸钠 （pH 5.0 ）及异丙醇。 操作步骤 1）在紫外灯下将含有DNA片段的琼脂糖凝胶切下，转移到一个自备的1.5 ml 离心管中。 * 尽量减少多余的凝胶体积，可缩短溶胶时间。 2）称量切下的凝胶重量，加入3倍体积的Buffer G （每1mg凝胶换算为1µl凝胶体积）。 * 比如100mg凝胶应加入300 µl BufferG。 * 如果凝胶浓度大于2% ，应加入6倍体积的BufferG。 3）将装有凝胶的离心管50°C水浴直至凝胶完全溶解（大约5-10分钟）。 * 溶胶的过程中每隔2-3分钟翻转一次离心管以帮助凝胶溶解，并观察凝胶是否彻底溶解。 * BufferG 中所添加的染料可帮助观察凝胶是否彻底溶解，同时可指示pH值，溶胶时如果溶液呈紫红 色，则应加入10 µl 3 M 醋酸钠（pH 5.0 ）使溶液恢复至原来的颜色，否则将影响DNA结合到纯化柱上。 4）加入1倍凝胶体积的异丙醇，混合均匀。 * 如果回收的DNA片段在500bp~4kb之间，可省略本步骤。 * 比如从100 mg凝胶中回收DNA ，应加入100 µl异丙醇。 * 如果从大于2%的凝胶中回收DNA ，则应加入2倍凝胶体积的异丙醇。 5）将溶胶液转移到核酸纯化柱中（核酸纯化柱置于2ml 离心管中），12000 rpm 离心30秒。 * 如果溶胶液体积大于750 µl （相当于从250 mg凝胶中回收DNA），应分两次离心过柱。 6）弃2ml 离心管中的滤液，将核酸纯化柱置回到2ml 离心管中，加入500 µl Buffer WS, 盖上管盖， 12000 rpm 离心30秒。 * 滤液无须彻底弃尽，如果要避免粘附在离心管管口的滤液对离心机的污染，可将2ml 离心管在纸巾上 倒扣拍击一次。 7）弃2ml 离心管中的滤液，将核酸纯化柱