SFRP过表达对结肠癌细胞株HCT基因表达谱的影响.pptxVIP

SFRP过表达对结肠癌细胞株HCT基因表达谱的影响会计学第1页/共20页研 究 背 景第2页/共20页研究背景结直肠癌的发病率CA Cancer J Clin. 2008; 58: 161-179 第3页/共20页研究背景Wnt信号通路 第4页/共20页研究背景分泌型卷曲相关蛋白SFRP 一组分泌型糖蛋白家族SFRPs有五个家族成员在人类组织中表达定位于染色体8p 12～11.1 包括一个特有的同源半胱氨酸富含域（CRD）的N-末端和一个C-末端。 （除SFRP3以外）第5页/共20页研究背景分泌型卷曲相关蛋白SFRP通过与Wnt信号的蛋白质相互作用以阻止它们结合到Fz蛋白或与Fz形成无功能复合物而阻碍Wnt信号 第6页/共20页研 究 目 的检测SFRP4基因转染肠癌细胞株HCT116后基因表达谱的变化，深入探讨SFRP4在结直肠癌发生中的作用机制。 第7页/共20页技术路线pcDNATM重组质粒双酶切鉴定转染HCT116后筛选稳定表达株WB鉴定SFRP4表达基因芯片检测（Pathway分析）第8页/共20页结果pcDNATM质粒的构建及稳定转染株的鉴定芯片生物信息学分析RT-PCR验证部分基因芯片的结果第9页/共20页EcoRI和HindIII双酶切重组质粒后凝胶电泳图 载体大小为5500bp，SFRP4基因片段大小为1056bp 第10页/共20页Western Blot 检测pcDNATM质粒稳定转染HCT116细胞后SFRP4的表达 0道为空载体，1和2道为 第11页/共20页pcDNATM质粒的构建及稳定转染株的鉴定芯片生物信息学分析RT-PCR验证部分基因芯片的结果第12页/共20页上调的MAPK家族基因 GenBank ID Gene nameCommentsInduction-fold NM_001040056MAPK3丝裂素活化蛋白激酶34.3NM_001006617MAPKAP1丝裂素活化蛋白激酶相关蛋白15.0NM_002756MAP2K3MAPKK32.3NM_007181MAP4K1MAPKKKK12.8NM_021970MAP2K1IP1MAPKK1相关蛋白12.3NM_021284MEK蛋氨酸脑啡肽3.0第13页/共20页下调的TNF家族基因GenBank ID Gene nameCommentsInduction-foldNM_006291TNFAIP2肿瘤坏死因子，alpha-诱导蛋白20.25NM_006290TNFAIP3肿瘤坏死因子，alpha-诱导蛋白30.38NM_014350TNFAIP8肿瘤坏死因子，alpha-诱导蛋白80.25NM_003844TNFRSF10A肿瘤坏死因子受体超家族10A0.44NM_003840TNFRSF10D肿瘤坏死因子受体超家族10D0.5第14页/共20页凋亡相关基因的改变GenBank ID Gene nameCommentsInduction-foldNM_000875IGF1R胰岛素样生长因子受体4.9NM_000043FASTNF受体超家族成员62.6NM_006538BCL2L11Bcl2-L110.13第15页/共20页pcDNATM质粒的构建及稳定转染株的鉴定芯片生物信息学分析RT-PCR验证部分基因芯片的结果第16页/共20页RT-PCR验证基因芯片结果1，细胞转染SFRP4前；2，细胞转染SFRP4后。β-actin作为对照。 第17页/共20页讨论我们通过基因芯片技术对基因组进行高通量的研究，通过生物信息学分析，我们筛选出比较重要的p38MAPK信号通路相关基因、TNF家族基因和凋亡有关基因的变化来探讨SFRP4对肿瘤细胞的作用机制。第18页/共20页讨论MAPK信号通路参与细胞增殖、分化及凋亡的调控，并在细胞恶性转化的病理过程中发挥重要作用 肿瘤坏死因子（TNF）家族是一类具有广泛生物学活性的分子，具有抗肿瘤、调节细胞生长分化等作用。它能直接抑制肿瘤增殖和诱导凋亡，有较强抗肿瘤的作用 结直肠癌细胞表达SFRP4后，促进凋亡和抑制凋亡的因子同时发生改变，提示其对凋亡的调控是一个复杂的过程。 第19页/共20页谢谢！Wnt信号通路在胚胎发育及肿瘤发生、发展过程中起着重要作用;Wnt信号通路异常活化与结直肠癌的发生密切相关。90%以上的结直肠癌存在Wnt信号转导通路的异常激活结构上与Wnt通路的受体（frizzled Fz）具有同源性