光谱实验-临床.pptxVIP

实验: 紫外分光光度法同时测定 维生素Vb2和维生素C; 10ml以上液体的移取用量筒;; (3) 实验1 同时测定维生素VB2和维生素C 2．实验目的 掌握在紫外区中同时测定—个双组分体系维生素VB2和Vc的实验方法。 2．仪器和试剂 T6型紫外-可见分光光度计； ，石英比色皿2只，容量瓶和离心管若干。VB2（AR）, VC；未知溶液 ;在a和b的最大吸收波长λ1及λ2处，分别测定混合物的吸光度Aλ1、Aλ2 ;解联立方程组，求得出各组分的含量;维生素B2又叫核黄素，分子式：C17H20N4O6 ， 分子量：376.36 。分子结构如下图;维生素又称抗坏血酸，分子量为176.1，其分子结构中具有二烯醇结构。分子结构如下图;它们二者都是水溶性维生素，从而能够在紫外可见区测定。 维生素B2具有帮助人体抵御寒冷的作用，可以增强人体在寒冷环境中的适应能力。单纯补充维生素B2，可以使人体耐受的寒冷温度降低2-3℃。一般人在零下5-6℃时可能发生冻伤，而补充维生素B2之后，零下7-9℃时才发生冻伤。而抗坏血酸参与体内一系列代谢和反应,能促进胶原蛋白和粘多糖的合成,增加微血管的致密性,降低其通透性及脆性,增加机体抵抗力。它们在一起可增加VC在低温下的保护作用。;4．操作步骤;5、VC标准溶液的配置：称取0.0132gVc标准品于100ml的烧杯中，用超声波助溶器帮助溶解并定容于500ml容量瓶中，摇匀，配成贮备液。 6、配制VC系列标准溶液：从上述贮备液中分别吸取0ml、0.5ml、1ml、2ml、4ml、8mlVc加入50ml离心管中，用蒸馏水定容至25ml。 7、确定VC最大吸收波长 从上述4ml试管中取2ml加入到比色皿中，用紫外分光光度计进行220-500nm的光谱扫描，找出其吸光度最大时的吸收波长（?max=243nm）。 8.绘制VC标准曲线: 用移液枪分别吸取分别吸取0ml、0.5ml、1ml、2ml、4ml、8mlVC 6支离心管中的溶液2ml加入到比色皿中，在?max444nm 和?max243nm处分别测6支试管的吸光度，以VC溶液浓度为横坐标，以蒸馏水为参比，A444nm和A243nm吸光度数值为纵坐标，建立VC浓度与吸光度的标准曲线 ;9.待测样品溶液制备 （1）VB2待测液的配置：取待测VB2片剂1片研细，称重后取5mg置于100mL烧杯中，加冰醋酸3mL与水10mL，置水浴（100 ℃）加热1小时，使维生素B2溶解，冷却???转移至50ml离心管中，加氢氧化钠液（1 mol/L）3 mL，用水稀释至刻度25ml作为待测液。 (2)Vc待测液的配置：取待测Vc片剂1片研细，称重后取5mg置于加入1支50ml离心管中，加入小量的纯水用玻璃棒捣细后，用水定容至25ml。;二、仪器操作;2、选择有水的一列进行光谱扫描，并对得到的光谱数据进行差减校正，得到VB2和Vc的最大吸收波长。;（1）绘制VB2和维生素的标准曲线：选择每种物质的最大吸收波长(对于VB2约为444nm，对于维生素C约为242nm)，以吸光度对浓度作图。 （2）计算VB2和维生素C在最大吸收波长（444nm和242nm）时的摩尔吸光系数：即标准曲线图的斜率。 （3）计算未知物中VB2和维生素C的浓度：根据吸光度的加和性，联立方程解求得。;以吸光度对浓度作图。 （2）计算VB2在444nm和242nm时的摩尔吸光系数,以及计算Vc在242nm和444nm时的摩尔吸光系数即标准曲线图的斜率。 （3）计算未知物中VB2和Vc的浓度：根据吸光度的加和性，联立方程解求得。 6．思考题 （1）多组分同时测定的波长选择的原则是什么？是否先要找出各组分的线性范围？ （2）进行多组分同时测定的准确度与哪些因素有关？;血清白蛋白简介;1、实验目的;2、实验原理;3、仪器试剂;pH;4.2 不同pH缓冲溶液的牛血清蛋白溶液配置; （1）对上述配置的不同pH的牛血清蛋白溶液进行紫外吸收光谱检测，记录不同编号的试管中在最大吸收处的吸收波长和吸光度.;2、选择有水的一行进行光谱扫描，并对得到的光谱数据进行差减校正，得到水和BSA+水的最大吸收波长。;1班1组;4.4 思考题