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实时荧光定量PCR方法简介 一．实时荧光定量PCR 的基本原理 理论上，PCR过程是按照2 （n代表PCR循环的次数）指数的方式进行模板的扩增。但n 在实际的PCR 反应过程中，随着反应的进行由于体系中各成分的消耗（主要是由于聚合酶 活力的衰减）使得靶序列并非按指数方式扩增，而是按线性的方式增长进入平台期。因此在 起始模板量与终点的荧光信号强度间没有可靠的相关性.如采用常规的终点检测法（利用EB 染色来判断扩增产物的多少，从而间接的判断起始拷贝量),即使起始模板量相同经 PCR 扩 增、EB染色后也完全有可能得到不同的终点荧光信号强度。 为了能准确判断样品中某基因转录产物（mRNA）的起始拷贝数，实时荧光定量PCR 采 用新的参数-—Ct 值,定量的根本原理是Ct 值与样品中起始模板的拷贝数的对数成线性反比 关系。 Ct值是如何得到的 在实时荧光定量PCR 的过程中，靶序列的扩增与荧光信号的检测同时进行,定量PCR仪全 程采集荧光信号，实验结束后分析软件自动按数学算法扣除荧光本底信号并设定阈值从而得 到每个样品的Ct值。 Ct值的定义 Ct值中的“C”代表Cycle （循环）, “t”代表检测threshhold(阈值）,其含义是PCR扩增 过程中荧光信号强度达到阈值所需要的循环数；也可以理解为扩增曲线与