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实时荧光定量PCR 技术 实时荧光定量PCR 技术 1996 年由美国A lied Biosystems 公司推出，由 于该技术不仅实现了PCR 从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR 相比，它具有特 异性更强、有效解决PCR 污染问题、自动化程度高等特点，目前已得到广泛应用。 本文试就其定量原理、方法及参照问题作一介绍。 实时荧光定量 PCR 原理 所谓实时荧光定量 PCR 技术，是指在 PCR 反应体系中加入荧光基团， 利用荧光信号积累实时监测整个 PCR 进程，最后通过标准曲线对未知模板 进行定量分析的方法。 1. Ct 值的定义 在荧光定量 PCR 技术中，有一个很重要的概念 -- Ct 值。C 代表 Cycle ， t 代表 threshold ，Ct 值的含义是：每个反应管内的荧光信号到达设定的域 值时所经历的循环数（如图 1 所示）。 2. 荧光域值（threshold ）的设定 PCR 反应的前 15 个循环的荧光信号作为荧光本底信号，荧光域值的缺 省设置是 3-15 个循环的荧光信号的标准偏差的 10 倍，即：threshold = 10 ′ SDcycle 6-15 3. Ct 值与起始模板的关系