重组蛋白的表达系统详细.pptxVIP

会计学;一、 原核表达系统;1.1 表达菌株;表2 常用E. coli表达菌株;1.2 质粒载体;启动子： 表达重组蛋白时，我们需要考虑启动子的强弱、作用方式、调控方式和本底表达水平。表达载体通常选用强启动子以提高表达量，但弱启动子也有其优点，如降低本底表达、增加可溶表达、表达小量伴侣蛋白等。按照作用方式，启动子可以分为两类：组成型表达的启动子使宿主不停地表达重组蛋白，常用于工业生产，如σS等；诱导型表达的启动子使宿主仅在受到诱导（诱导剂、温度等）时表达目的蛋白，诱导型启动子使重组蛋白的表达容易控制，同时降低了外源蛋白对细菌生长的影响。 ;图1：大肠杆菌表达质粒pET-22b(+)图谱及多克隆位点;;早期大肠杆菌表达体系中，常见的启动子是lac和lacUV5。lac是一个弱启动子，很难使外源基因得到高表达。目前使用的含有需要小量共表达的蛋白(如分子伴侣，蛋白抑制剂等)的载体，有很多都采用了经典的lac启动子。 强启动子中，tac和trc是lac启动子的变体，其重组蛋白产率能够达到细胞总蛋白量的15-30%。araBAD启动子的诱导剂是便宜无毒的L-阿拉伯糖，本底表达量低，启动能力比tac稍弱。T7则是目前原核表达系统中最高效的启动子，pET表达系统即是以它为中心构建的。T7启动子来源于λ噬菌体，专一与T7启动子结合的T7 RNA聚合酶则被整合在宿主菌的基因组中。在λ噬菌体