丙二醛检测试剂盒.docxVIP

丙二醛(MDA)检测试m(TBA荧光法) 简介： 动物或植物细胞发生氧化应激(oxidativestress)时，会发生脂质氧化。丙二醛(Malondialdehyde,MDA)是一种生物体脂质氧化的天然产物，一些脂肪酸氧化后逐渐分解为一系列包括MDA在内的复杂化合物此时通过检测MDA的水平即可检测脂质氧化的水平，因此MDA的测定被广泛用作脂质氧化的指标。生物体内的一些其它生化反应也会产生MDA，例如thromboxanesynthase也可以催化产生，但只要在测定时设置适当对照即可观察到脂质氧化水平的变化。 丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA荧光法，MDAAssayKit)又称脂质氧化(MDA)检测试剂盒，是采用一种基于MDA和硫代巴比妥酸(thiobarbituricacid,TBA反应产生红色产物的显色反应，随后通过荧光比色法用于对血浆、血清、尿液、动植物组织或细胞裂解液中MDA进行定量检测，广泛用于脂质氧化(lipidperoxidation冰平检测。丙二醛在较高温度及酸性环境中可与TBA发生反应，形成红色的MDA-TBA加合物，MDA-TBA加合物在处有最大吸收，以为激发光，据此可以通过荧光比色法进行检测。本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 组成： ~编号 名称一一 TO1015 50T TO1015 100T Storage 试剂(A):TBA 0.4g 0.8g RT避光 试剂(B):TBA稀释液 50ml 100ml RT避光 试剂(C):抗氧化剂 2.5ml 5ml 4°C 试剂(D):MDA标准品(1mmol/L) 0.2ml 0.4ml -20°C避光 使用说明书 说明书 自备材料： 1、蒸馏水2、离心管、小试管或96孔板3、荧光分光光度计或荧光酶标仪4、水浴锅或恒温箱5、离心机操作步骤(仅供参考): 1、样本处理： 血清、血浆、尿液、脑脊液样本：从待测样本中分理出的血清或血浆不应有溶血。取待测液体样本1,加入MDA沉淀液1,混匀，室温静置，离心，弃上清。加入蒸馏水，振荡混匀，以便充分溶解沉淀（MDA样品），即获得MDA待测液。 组织、细胞等样本：组织或细胞可以使用PBS或LeageneWestern及IP细胞裂解液等进行匀浆或裂解。匀浆或裂解组织时，组织重量占匀浆液或裂解液的比例应适当；对于细胞，每106个细胞使用l裂解液或匀浆液。匀浆或裂解后，离心，取上清用于后续测定。匀浆或裂解等样品制备步骤宜在冰浴或4C进行操作。样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的MDA含量。取待测匀浆后提取的上清，加入MDA沉淀液，混匀，室温静置，离心，弃上清。加入蒸馏水，振荡混匀，以便充分溶解沉淀（MDA样品），即获得MDA待测液。 ?本试^盒对于样品中的常见化学成分的兼容性参考下表： 试剂类别 化学成分 是否干扰 缓冲液 HEPES(100mM) 否 Borate(50mM) 否 Phosphate(100mM) 否 Tris(25mM) 否 去垢剂 CHAPS(1%) 否 TritonX-100(1%) 否 Tween20(1%) 否 抑制剂/螯合剂 PMSF(200pM) 否 EDTA(1mM) 否 EGTA(1mM) 否 Antipain(100pg/m1) 否 Chymostatin(10pg/m1) 否 Leupeptin(10pg/m1) 否 Trypsin(10pg/m1) 否 其他 G1ycero1(10%) 否 Sucrose(250mM) 是 2、TBA工作液的配制：称取适量TBA,用TBA稀释液配制成浓度为TBA工作液。例如取0.068gTBA用TBA稀释液配制，最终浓度即为TBA工作液。TBA工作液需完全溶解后再使用，可以加热到60-70C促溶，并可通过反复剧烈Vortex促溶。配制好的TBA工作液4C避光保存，至少3-4个月内有效。 3、稀释标准品：取适量MDA标准品（1mmo1/L）用蒸馏水稀释至0.5、1、2S5S10pM（如果进行简易快速检测，标准品直接稀释）。配制好的MDA标准品4C保存，至少3-4个月内有效。 4、样品测定： ①在离心管或其它适当容器内加入蒸馏水作为空白对照。加入上述不同浓度标准品用于制作标准曲线（如果进行简易快速检测，直接加入浓度为0.5pM的标准品）；加入1ml样品用于测定；随后加入1mlMDA检测工作液。可参考下表设置检测反应体系，依次加入试剂： 加入物质 空白管 标准管 测定管 蒸馏水 1ml . . MDA标准品 . 1ml . MDA待测液 1ml TBA工作液 1ml 1ml 1ml 抗氧化剂 30pl 30pl 30pl 混匀，加盖，水浴煮沸（勿动），加热时务必注意避免液体暴