质粒载体解析.pptx

会计学第一节 质粒载体的概况第1页/共99页一 质粒的定义、命名、分类、分布二 质粒的基本生物学特性三 质粒的分离与纯化 一、质粒的定义、命名、分类、分布第2页/共99页定义：质粒是一类寄宿于细胞内，独立于染色体外的自我复制并稳定遗传的环状双链DNA分子。 命名：小写字母p代表质粒，两个大写字母代表发明者，后接实验编号，分类：分布：1）根据质粒的性状特征第3页/共99页 ①F质粒：又叫F因子或性质粒(sexplasmid)。 ②R质粒：通称抗药性因子。编码有一种或数 种抗菌素抗性基因， ? Co1质粒 ：产生大肠杆菌素因子。编码 有控制大肠杆菌素合成的基因质粒分类第4页/共99页2）根据质粒的传递性3）根据质粒的拷贝数4）根据质粒和细菌的关系4.质粒分布、大小和数目二、质粒的基本特性第5页/共99页 1.寄生性 2．质粒DNA构型 3．质粒DNA编码的表型 4．质粒DNA的转移 5．质粒DNA的迁移作用 6．质粒DNA的复制类型 7．质粒的不亲和性 8.其他特性 质粒的基本生物学特性第6页/共99页1.寄生性2．质粒DNA (图4—1)第7页/共99页大肠杆菌质粒分子的结构示意图第8页/共99页质粒DNA分子具有三种构型 SC构型:共价闭合环形DNA(cccDNA)， 超螺旋的 SC构型；OC构型: 开环DNA(ocDNA)，OC构型； L构型:发生双链断裂而形成线性分子 (LDNA)，L构型。（图4－2）第9页/共99页环形双链DNA质粒分子的三种构型第10页/共99页 (a) (b) 质粒DNA的分子构型 质粒DNA琼脂糖 凝胶电泳模式图OCL SC3.质粒DNA编码的表型第11页/共99页抗性特征、代谢特征、修饰寄主生活方式的因子， 质粒DNA编码的基因有产生抗菌素的基因、芳香族化合物降解基因、糖酵解基因、产生肠毒素基因、重金属抗性基因、产生细菌素的基因、诱发植物肿瘤基因、产生硫化氢基因，以及寄主控制的限制与修饰系统的基因等第12页/共99页第13页/共99页4．质粒DNA的转移第14页/共99页(1) 接合型质粒的自我传递(2) F质粒(3 )质粒DNA的接合转移 ①细胞交配对的形成 ②质粒DNA的转移细菌的接合作用第15页/共99页 在合适的条件下，雄性细胞和雌性细胞混合培养，形成 雌—雄细胞配对过程为细菌的接合作用(conjugation)。 在雌雄细胞配对期间，雄性细胞中的F因子按滚环复制模式(rolling circle replication model)，第16页/共99页(1) 接合型质粒的自我传递 格兰氏阴性细菌的质粒分成接合型和非接合型。 接合型的质粒(conjugative plasmid)，又叫自我转移的质粒。除了具有自主复制所必须的遗传信息之外，还带有一套控制细菌配对和质粒接合转移的基因。 非接合型的质粒(non—conjugative plasmid)，不能自我转移是因为没有了控制细胞配对和接合转移的基因。第17页/共99页第18页/共99页(2)F质粒 又叫F因子(ferti1ity factor) ，单拷贝的接合型质粒，其分子量约为94kb，共编码19个转移基因(tra)。F质粒有三种存在方式： (i)以染色体外环形双链质粒DNA形式存在，不带有染色体的基因或DNA区段。这样的细胞叫做F+细胞。(ii)以染色体外环形双链质粒DNA形式存在，同时还携带着细菌的染色体基因或DNA区段。这样的细胞叫做F’细胞。 (iii)以线性DNA形式从不同位点整合到寄主染色体上，这样的细胞叫做Hfr细胞(高频重组细胞)。大肠杆菌F因子基因图第19页/共99页第20页/共99页(3)质粒DNA的接合转移机制 ①细胞交配对的形成：大肠杆菌F质粒编码的特异性性须，在受体细胞的识别以及在确立配对细胞之间的表面接触中起着重要的作用。它至少需要25种以上的转移基因编码产物的参与。 ②质粒DNA的转移F质粒DNA的转移是从转移起点oriT开始的。第21页/共99页 大肠杆菌F质粒转移区结构---该区编码着控制细胞接合作用的基因质粒DNA的接合转移及复制第22页/共99页 5．质粒DNA的迁移作用第23页/共99页 共存的接合型质粒引发的非接合型质粒的转移过程，叫做质粒的迁移作用。第24页/共99页F因子带动Co1E1质粒转移的条件6.质粒的复制类型第25页/共99页两种不同的复制型： “严紧型” (stringentplasmid)； “松驰型” (relaxedplasmid)。质粒拷贝数的定义： 每个细菌细胞中所含有的质粒DNA 分子的数目第26页/共99页第27页/共99页7．质粒的不亲和性 (1) 质粒的不亲和性现象 (2) 质粒不亲和性的分子基础第28页/共99