Trizol法提取RNA实验步骤及原理新手详细注释版.docxVIP

Trizol法使用步骤 一、分别纯化的基本源理 研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分别和纯化RNA.RNA质量的高低常常影响cDNA库，RT—PCR和NorthernBlot均分子生物学实验的成败。Trizol是一种新式总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质,能迅速破碎细胞，控制细胞释放出的核酸酶。 二、用户需自备的试剂和资料 无水乙醇、氯仿、Glycogen（可能需要)、1。5mlEppendorf管(RNase—free)、Tips(RNase—free） 三、准备工作 RNase酶特别牢固，是以致RNA降解最主要的物质。它在一些极端的条件能够暂 时失活，但限制因素去除后有迅速复性。用老例的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白抑 制剂都不能够是RNase完满失活。它广泛存在于人的皮肤上，因此，在与RNA制备有关 的分子生物学实验时，必定戴手套。 RNase的又一污染源是取液器，依照取液器制造商的要求对取液器进行办理。一般情 况下采用用DEPC(焦炭酸二磷脂，一种RNase控制剂）配制的70％乙醇擦洗取液器的 内部和外面，基本达到要求.取RNase-free的物品时必定戴手套。 1、料制品的办理 尽可能使用无菌，一次性塑料制品，已注明RNase-Free的塑料制品，如没有开封使用过平时没有必要再次办理。对于国产塑料制品，原则上都必定办理方可使用.办理步骤以下： 1）在玻璃烧杯中注