Transwell是检测细胞侵袭能力的检测方法.docxVIP

Transwell是检测细胞侵袭能力的检测方法 我们所使用的是Chemicon公司的ECM554，基质胶已经包被好了，买来就可以用，很方便,而且我们算过,跟自己买胶来包被价格相差不大。这类胶4度下很 软,37度则变得比较坚硬，因此用前应先放在培养箱中10分钟作用，使胶完好凝固。 该试剂盒对穿过膜的细胞进行荧光染色，再用裂解液裂解细胞后检测荧光值。我们在实质使用的时候对穿过膜的细胞采用1%结晶紫染色,镜下计数细胞数目.结晶紫也可以用33%醋酸溶解,再用酶标仪570nm检测，同样可以反应穿过细胞数 因为基质胶的厚度直接影响穿过膜的细胞数，因此建议有条件的话还是买这类已经铺好胶的试剂盒,比较可靠。 说明书该公司网上可以下载，对原理也有比较详细的阐述，可以去查一下. 我们做的时候，上室用0.5％BSA的培养液，下室用5%血清的培养液,下室血清的浓度可依照细胞种类的不同样进行调整,若是细胞侵袭能力强,可合适降低血清浓 度,否则可合适提高血清浓度。需要注意的是： 1。上室内的细胞数目要合适，过多,穿过膜的细胞会过多过快，若是用计数法 的话将难以计数；最少也要保证在收样的时候，上室内还要有细胞存在。详细细胞密度需要自己探究。 2。细胞计数的正确性对结果影响很大，各组间最好不要分开计数.尽量用同一密度的细胞悬液恩赐不同样办理,保证各组细胞量一致 3.对细胞的办理不可以影响细胞生计。否则难以必然是