自然科学分子生物学期末复习重点.pptxVIP

会计学第1页/共57页绪 论 证明DNA是遗传物质的两个关键性实验：①肺炎链球菌在老鼠体内的毒性实验②噬菌体DNA侵染大肠杆菌实验。 这两个实验主要的论点证据是生物体吸收的外源DNA(而并非蛋白质)改变了其遗传潜能。第2页/共57页DNA重组技术 将不同的DNA片段按照人们的设计定向连接起来，在特定的受体细胞中与载体同时复制并得到表达，产生影响受体细胞的新的遗传性状。 主要步骤包括：①目的基因的获取（化学合成,基因组文库,cDNA文库, PCR）；②克隆载体的选择和构建：将外源DNA连到克隆载体上，外源 DNA则可作为克隆载体的一部分在受体细胞中复制。③目的基因与载体的拼接；④重组DNA分子导入受体细胞（电穿击法、热击法）；⑤筛选含重组分子的受体细胞（抗药性标志选择等方法）。分离目的基因选择并构建克隆载体分别切割目的基因和克隆载体，产生切口目的基因与克隆载体连接成重组DNA转化受体细胞（eg:E.coli）筛选出获得重组DNA的受体细胞将目的基因构建到表达载体上并导入寄主细胞产生目的蛋白第3页/共57页二、重组 DNA的主要步骤 （五大步骤）分切连转筛第4页/共57页第二章 染色体与 DNA染色体与DNA的关系细胞内的DNA主要在染色体上,即染色体是遗传物质的主要载体。注意：染色体外遗传物质原核生物中，DNA还存在于质粒中。真核生物中，DNA还存在于线粒体、叶绿体。第5页/共57页DNA的半保留复制 DNA复制时，亲代DNA双螺旋结构解开，分别以解开的两股单链为模板，以为原料，严格按照碱基配对原则合成与模板链互补的新链。从而形成两个子代DNA双链，其结构与亲代DNA双链完全一致。因子代DNA双链中的一股单链源自亲代，另一股单链为合成的新链，形成的双链与亲代双链的碱基序列完全一致，故称为半保留复制。DNA的半保留复制保证了DNA在代谢上的稳定性。第6页/共57页原核生物DNA复制过程中有关的酶及蛋白①解链酶（Helicase）②拓扑异构酶（ Topoisomerase）③单链结合蛋白（SSB）④引物酶（Primases）⑤DNA聚合酶（ polymerases）⑥DNA 连接酶（Ligases）第7页/共57页DNA的修复错配修复：恢复错配。（保存母链，修正子链）。碱基切除修复：切除突变的碱基。核苷酸切除修复：修复被破坏的DNA（DNA链上相应位置的核苷酸发生损伤，导致双链之间无法形成氢键）DNA的直接修复第8页/共57页DNA的转座：所有生物体中都有一类特殊的随机DNA序列。这些序列有特殊的能力，能够作为一个不连续单位从基因组的一个位置移动到另一个位置。这种重新定位的能力叫做转座。 DNA的转座是由可移位因子介导的遗传物质重排现象。在质粒、病毒、原核生物、真核生物基因组中均有存在。可引起基因的插入突变、缺失、倒转，产生新的基因等。转座类型： 复 制 性 转 座：整个转座子被复制后进行移位； 非复制性转座：转座子直接被移位。转座子类型： a. 插入序列(IS) b. 复合转座子 c. TnA家族第9页/共57页第三章 生物信息的传递（上）RNA主要以单链存在;RNA既担负贮藏及转移遗传信息的功能，又能 作为核酶直接在细胞内发挥代谢功能。不对称转录：在DNA双链分子中，转录通常只在DNA的一条链上进行，另一条链则不能转录，但可能对转录起调节作用，这种转录方式称为不对称转录。第10页/共57页原核生物的转录过程模板识别：RNA聚合酶与启动子相互作用并相结合。 原核直接识别；真核不能，需转录调控因子按特定顺序结合于启动子上。转录起始：RNA链上第一个核苷酸键的产生，生成由RNA聚合酶,模板和转录5端首位核苷酸组成的起始复合物。通过启动子：转录起始后直到形成9个核苷酸短链。转录延伸：RNA聚合酶离开启动子，沿DNA链移动并使新生RNA链沿5’-3’不断伸长。在原核生物,因为没有细胞膜的分隔,转录未完成即已开始翻译,而且在同一DNA模板上同时进行多个转录过程。转录终止：到转录终止位点时，RNA-DNA杂合物分离，DNA恢复双链，RNA链释放。原核生物转录的终止分依赖ρ因子（强终止）与不依赖ρ因子（弱终止）。 ρ因子是NTP酶，通过催化各种核苷酸水解来促使新生RNA链从三元转录复合物中解离出来，从而终止转录。不依赖ρ因子的终止,其RNA产物3‘-端往往形成茎环结构,其后又有一串寡聚U。茎环结构可使因子聚合酶变构而不再前移,寡聚U则使RNA-DNA3’出现不稳定的rU·dA区域，利于RNA从DNA模板链脱出。第11页/共57页启动子：一段位于结构基因5‘端上游的DNA序列，是RNA聚合酶的结合区，其结构直接关系转录的特异性与效率。 原核:TTGACA-35 TATAAT-10起始位点 真核:增强子GC-110CAAT-70