基因芯片技术在病原微生物耐药性检测中的应用(讲座).pdfVIP

H 基 因芯 片 技 术 在 病 原 微 生 物 耐 药 性 检 测 中 的应 用 一、基因芯片技术的概念和原理 （一）概述 基因芯片技术是将成千上万个代表着不同的寡核苷酸探针，顾向华在支持无的表面上 成为芯片，然后将待测的样品，包括像 DNA 、RNA CDNA 等进行标记，标记的方式有同 位素和银光标记，然后将待测无和同样的探针进行杂交，通过对杂交信号的监测和处理而得 到待测，五种相关的表达信息之所以讲到相关基因的表达信息，因为相当一部分基因芯片是 来做基因的表达研究的，基因芯片技术是建立在探针和再叫测序上的一种高质量的序列分析 手段。她通过将大量的探针分子固定在支持物上，与标记的样品进行杂交，通过检测杂交信 号的强度以及杂交信号的分布来进行分析，基因芯片技术可以在一块一平方厘米大的小芯片 上，根据需要固定成千上万的基因，以此形成密集的基因方阵，来实现对千万个基因的同步 检测。 （二）基因芯片基本原理 基因芯片技术主要涵盖了一个固相的核酸序列，作为他的靶点而以一种或多种标记的 样本，也就是说探针与芯片进行杂交，还有一个检测系统开进行定量检测，基因芯片的基本 原理也就是利用基因互补配对的原则，在一个载体上来进行基因检测，实际上是一个高密度 的杂交技术。由此我们可以得到基因芯片技术包括以下四个主要的基本步骤：芯片制备、样 品制备、杂交反应和信号检测和结果分析。 （三）基因芯片的特点和优势 H H 基因芯片的特点和优势，主要在于①速度快。最新的基因芯片技术她主要在于杂交时 间可以缩短在一分钟以内；②效率高。在一张芯片上可以固化检测数千个基因；③成本降低 就是使芯片更小，检测更多样化；④制动化程度高，减少人为误差。 （四）基因芯片的检测过程 基因芯片的检测过程，首先是寡核苷酸的合成，也就是基因芯片的制备，基因芯片的 实质是高度集成的寡核苷酸阵列，因此制造基因芯片，首先要解决的问题是：要如何在基因 芯片上定位，合成高密度的核酸探针，目前基因芯片的合成主要有三种方法：①光控化学合 成技术；②雅典印刷发；③点样发其中前两种实验为合成光控化学合成技术，是将故乡化学 合成个光科技书，有机地合成在一起，首先将支持物表面按计划或者羟基化。 接下来的过程是荧光标记与同位素相比，荧光的优势是：他的低污染可以同时检测不 同的荧光，不同银光的颜色可能是不一样的，不同银光的耐光不同，随着外界环境的干扰和 时间的延伸存在着银光崔灭现象；第三点需要注意的是：过度标记的问题也就是过于高浓度 的标记，可能是这些银光集团的距离过大而影响最后的检测效率。 基因芯片的样本。包括 DNA 和 RNA 芯片 DNA 准备相对比较简单耳 RNA 就要注意 以下几点 1 减少 RNA 的降解 2 优选 RNA 纯化方法 3 在标记前检测 RNA 的量 4 在标记前 检测 RNA 的质量5 使用统一的样本方案以确保检测的可重复性因为生物样品的成分比较复 杂为了提高准确性需要先对样品进行处理比如说来自血液和组织中的DNA 或者LRNA 样本 要先扩征然后再用银光素来标记探针。 在芯片这一步要注意的是：要通过预杂交来优化杂交的条件和缓冲液另外芯片杂交过 程与我们熟悉的很多面性过程比较类似也就是说严格的洗涤对实验的成功是至关重要的。 H H 基因芯片的检测技术最后一步就是数据处理，她包括信号检测质量评估数据整理和聚 类分析。首先是原始数据的获取、提取生物样本的MANA 并且反转录成 CDMA 在压箱中 与探针进行杂交这一类的实验过程。细末以后用扫描一部或芯片上的信号这个信号图像的基 因芯片原始数据，当前已经有许多图片处理的分析软件，他们能够定位并且识别芯片上的每 个杂交点，通过背景调整或者分割技术，除去图像上各种噪声在顶两个钟信号轻度比，最后 决定基因的变化情况数据处理，还包括数据处理和分析原始的数据化和标准化，并且转化成 矩阵以后，通过统