基于rtPCR方法的病毒气溶胶快速检测方法(1).pdfVIP

基于 rt-PCR 方法的病毒气溶胶快速检 测方法 摘 要：气溶胶传播途径被世卫组织认为是造成大面积病毒传播的主要原因。 且封闭空间内空气流通较弱，携带有病毒颗粒的气溶胶可以更长时间悬浮于空气 中，从而易导致更高的病毒感染率。开发针对人员密集场所的一体化全自动的快 速实时监测系统，将有望实现空气中病毒颗粒的高效富集和快速实时监测，遏制 疫情蔓延。项目的成功实施，不仅可以有效解决环境病毒难以实时检测的问题， 填补环境病毒检测领域的市场空白，而且可以促进核酸检测和气体检测设备跨行 业的融合发展，催化相关技术领域的快速产业化发展。 关键词：病毒气溶胶、环境检测、公共卫生、基础设施 一、引言 本项目主要包括病毒气溶胶环境样本采集、样本处理及核酸自动化提取、核 酸样本检测、医废处理系统、数据传输与现场设备联动系统及基于快捷检测装置 的流行病学调查和风险预警体系的构建六大方面。 重点突破了疫情防控过程中的管理体制问题及早期预警技术。在管理体制方 面，建立以病毒风险指数（VRI）为核心的区域预警体系，通过构建反应快速、 层次结构清晰、证据可溯源的区域病毒监测网络，来形成阻止病毒扩散的“防火 墙”。在早期预警技术方面，引入病毒气溶胶监测及溯源的概念，将具有高等级 生物防护标准的实验室检测手段集成到可移动设备中，形成现场快速筛查与病毒 溯源相结合的技术支持体系。 产品开发方面，本项目重点突破环境样本采集模块的构建及其性能优化，病 毒核酸自动化提取系统的开发，荧光聚合酶链式反应（ PCR）扩增检测模块优化， 分别解决目前空气病毒快速检测中面临的病毒采集、核酸提取和快速扩增检测这 三个“卡脖子”环节的关键问题。在此基础上，以密封腔体反应器为载体，通过 相关模块的整合，完成系统构建。最终，本项目创造性地将具有高等级生物防护 标准的实验室检测手段集成到可移动设备中，布置到任何疑似高风险感染和人员 密集区域开展实时监测，并进行病毒数据的长期收集，构建病毒预防模型和建立 病毒预警体系。 二、系统设计框架 2.1 项目所涉及的技术领域与工艺范畴 整体而言，本项目主要针对新冠病毒疫情防治的重大需求，提出通过水溶性 纳米纤维膜富集环境气溶胶样本中的病毒颗粒，并利用磁珠法病毒核酸提取系统 和自动化控制封装技术，构建具备病毒过滤采集-纳米纤维膜溶解转移-病毒核酸 液相提取-荧光PCR检测的多功能、全自动、小型化的新冠病毒检测系统，从而 实现针对空气中病毒颗粒的快速准确实时监测。涉及产品系统性集成技术、医废 处理技术、气溶胶采集技术、自动化控制技术、数据传输与分析技术、荧光PCR 检测技术以及密封技术等。 2.2 拟解决的关键技术问题 为实现空气样本中新冠病毒的快速检测和实时监测预警，需要监测仪器兼备 高效的病毒样本收集系统、病毒核酸快速提取系统、以及目标核酸特异性超灵敏 扩增检测系统。因此，将以基于旋风式空气颗粒收集技术与水溶性纳米纤维膜的 病毒气溶胶采集技术、基于磁珠法的核酸提取技术、基于荧光PCR 的检测技术为 核心，以采集模块、提取模块、检测模块反应器为载体，在密封腔体内实现如上 所需系统的搭建，从而最终开发出空气样本中新冠病毒的一体化快速检测系统。 相关关键科学问题和技术问题总结如下： 1）病毒的空气动力学尺度大约在 30nm-300nm，如何通过可变粒径采样系统， 在优化后的采样方案支撑下，在短时间内收集到足够数量的病毒颗粒，是本项目 需要突破的第一个技术难题。 2）如何通过优化水溶性纳米纤维膜的结构、制备策略以及膜材料种类，提 升化其对病毒颗粒富集的性能，并阐明纳米纤维膜的病毒富集机理，是本项目需 要阐明的关键科学问题。 3）如何通过优化磁珠的制备策略、磁珠表面基团的修饰策略和病毒核酸提 取试剂组分，进一步提升其在病毒核酸提取过程中的性能，是本项目需要解决的 另一个关键技术问题。 4）如何优化PCR检测体系，进一步提升病毒核酸的扩增效率、检测灵敏度 与特异性，同时降低生产成本，是本项目需要解决第三个关键技术问题。 5）如何通过模块设计创新、液路优化、自动化拓展等方式，有机整合空气 样本收集、膜溶解富集、病毒核酸提取、核酸PCR扩增检测等模块，来开发一种 低成本、便携式病毒捕获与检测一体机，从而实现针对空气中病毒颗粒的快速准 确实时监测，是本项目中拟解决的第四个关键技术问题。 2.3拟采用的技术原理、路线 本设备主要由空气微生