基因工程及其应用公开课.pptxVIP

基因工程及其应用公开课会计学第1页/共50页请你欣赏能产生人胰岛素的大肠杆菌第2页/共50页请你欣赏超级小鼠与超级鱼第3页/共50页请你欣赏能发光的水母不能发光的热带斑马鱼第4页/共50页请你欣赏基因工程第5页/共50页一、基因工程(gene engineering) 又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。通俗的说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状。原理操作环境操作水平结果基因重组生物体外DNA分子水平定向地改造生物的遗传性状，获得人类所需要的品种。第6页/共50页二、基因操作的工具1、 基因的“剪刀”——限制性核酸内切酶专一性： 识别特定核苷酸序列，在特定的切点切DNA，具特异性。并裂解磷酸二酯键，产生两个黏 性末端。 第7页/共50页二、基因操作的工具例：大肠杆菌的一种限制酶(EcoRⅠ)能识别 GAATTC序列，并在G和A之间切开。EcoRⅠ黏性末端第8页/共50页二、基因操作的工具思考:被同一种限制酶切断的几个DNA是否具有相同的黏性末端？第9页/共50页二、基因操作的工具2、基因的“针线” ——DNA连接酶作用： 将互补配对的两个黏性末端连接起来，使之成为一个完整的DNA分子。连接的部位：生成磷酸二酯键DNA连接酶的作用部位：G A A T T CG A A T T CC T T A A GC T T A A GG 用同种限制酶切割G A A T T CC T T A A A A T T CC T T A A G GG A A T T CC T T A A G二、基因操作的工具第10页/共50页基因的针线：DNA连接酶第11页/共50页二、基因操作的工具3、基因的运输工具——运载体常用的运载体：质粒、噬菌体和动植物病毒等质粒：存在于许多细菌和酵母菌等生物中,是细胞核（拟核）外能够自主复制的很小的环状DNA分子.　标记基因，便于进行检测。第12页/共50页二、基因操作的工具作为运载体必须具备哪些条件？1）能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。2）具多个限制酶切点，以便与外源基因连接。3）具有某些标记基因，便于进行筛选。如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等。质粒可作为有何特点？1、细胞染色体（或拟核DNA分子）外能自主复制的小型环状DNA分子；2、质粒的存在对宿主细胞无影响；3、质粒的复制只能在宿主细胞内完成。限制酶第13页/共50页三、基因操作的基本步骤从细胞中分离出DNA提取目的基因从大肠杆菌中提取质粒DNA连接酶目的基因与运载体结合目的基因导入受体细胞目的基因的表达与检测第14页/共50页三、基因操作的基本步骤第15页/共50页三、基因操作的基本步骤1）提取目的基因2）目的基因与运载体结合3）将目的基因导入受体细胞4）目的基因的检测和表达第16页/共50页三、基因操作的基本步骤目的基因的提取方法直接分离基因：人工合成基因：鸟枪法反转录法根据已知的氨基酸序列合成DNA　用限制酶切断成许多片段第17页/共50页三、基因操作的基本步骤⑴直接分离基因——鸟枪法　将供体细胞中的DNA用限制酶切割为许多片段，再用运载体将这些片段都运载到不同的受体细胞中去，让这些DNA片段在受体细胞中扩增。从中找出含有目的基因细胞，并将含有目的基因的DNA片段分离出来。　该法最大的缺点是带有很大的盲目性，工作量大。一般不适用于真核细胞的基因。DNA合成仪第18页/共50页三、基因操作的基本步骤⑵人工合成基因法①反转录法：以信使RNA为模板，在逆转录酶的作用下将脱氧核苷酸合成合成DNA(基因)。②直接合成法：根据蛋白质的氨基酸顺序推算出信使RNA核苷酸顺序，再据此推算出基因DNA的脱氧核苷酸顺序。用游离脱氧核苷酸直接合成相应的基因。三、基因操作的基本步骤第19页/共50页目的基因与运载体结合用与提取目的基因相同的限制酶切割质粒使之出现一个切口，将目的基因插入切口处，让目的基因的黏性末端与切口上的黏性末端互补配对后，在DNA连接酶的作用下连接形成重组DNA分子。目的基因与运载体结合的结果有三种可能：a、目的基因与目的基因结合，b、质粒与质粒结合，c、目的基因与质粒结合。 所以需要筛选。作用：将外源基因送入受体细胞第20页/共50页三、基因操作的基本步骤目的基因导入受体细胞常用的受体细胞：大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。导入方式：主要借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径第21页/共50页三、基因操作的基本步骤导入过程：运载体为质粒，受体细胞为细菌1）将细菌用CaCl2处理，以增大细菌细胞壁的通透性。 2）使含有目的基因的重组质粒进入受体细胞。3）目的基因在受体细胞内，随其繁殖而复制，由于细菌繁