大鼠肝组织中P糖蛋白的免疫印迹检测方法(1).pdfVIP

大鼠肝组织中 P-糖蛋白的免疫印迹检测方法 吴琼;杨友辉;杨健;薛维娜;李勇军;何彬;兰燕宇;刘亭 【摘要】Objective To determine the optimum experiment condition of detecting P-glycoprotein with western blotting (WB). Methods 6 male SD rats were selected randomly and fed the Polygonumorientale Flower Extract with the dosage of 0. 4g/(kg·d). The livers of 6 SD male rats were taken out and homogenated. Themicrosome was isolated by calcium ion precipitating and detected by BCA method. It was compared the effects of different protein treatments and different electrotransfer conditions. Results Only solubilizing at room temperature did obtained the destined protein compared with solubilizing at high temperature. It was more efficiency to use wet electroblotting which at constant voltage density of 120V for 2h. Conclusion Choosing samples denatured at room temperature, choosing wet electroblotting could be more repetitive and sensitive in the detection of P-glycoprotein by using the western blot (WB) assay. The expression of P-glycoprotein in liver of these six rats given Polygonumorientale FlowerExtract shows certain difference.%目的 探讨 Western Blot 检测 P-糖蛋白表达的实验优化条件.方法 随机选择 6 只雄性 SD 大 鼠,给予荭草花提取物 0. 4g/(kg·d)灌胃,连续灌胃 6d.采用钙盐沉淀法提取 6 只大 鼠肝微粒体,利用 BCA 法进行蛋白定量后,制备蛋白上样样品.比较不同样品处理方 法 、转膜方法 的检测效果.结果 与高温变性相比,样品经室温变性上样可检测到目 的 条带.湿法电转法较半干法电转法转膜效果好,且湿转条件选择 120V,2h 较为好. 结论 样品室温变性处理、120V,2h 的湿转转膜条件,是检测 P-糖蛋白较优的 Western Blot 方法.并且在经荭草花提取物给药后的 6 只 SD 大鼠肝组织内 P-糖蛋 白的表达呈现一定的差异. 【期刊名称】《贵州医药》 【年(卷),期】2018(042)001 【总页数】3 页(P9-10,封 3) 【关键词】蛋白免疫印迹法;P-糖蛋白 【作者】吴琼;杨友辉;杨健;薛维娜;李勇军;何彬;兰燕宇;刘亭 【作者单位】贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室, 贵州 贵阳 550004;贵州医 科大学贵州省药物制剂重点实验室, 贵州 贵阳 550004;贵州医科大学贵州省药物制 剂重点实验室, 贵州 贵阳 550004;贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室, 贵州 贵阳 550004;贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室, 贵州 贵阳 550004;贵州医 科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心, 贵州 贵阳 550004;贵州医科大 学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心, 贵州 贵阳 550004;贵州医科大学贵 州省药物制剂重点实验室, 贵州 贵阳 550004 【正文语种】中 文 【中图分类】R392-33 △通信作者,E-mail: P-糖蛋白(P-glyco protein,P-gp)是一种分子量为 170 kD ，由1 280 个氨基酸组 成的跨膜糖蛋白，P-gp 既能与药物结合，又能与 A