组织病理学讲义.pdfVIP

组织病理学讲义 正确的取材、合适的固定和良好的染色是优质病理工作的基础。病理工作最基本、最重要的技术是常规 组织病理技术。 为适应新技术的开展，要求所需材料： 1．组织细胞的形态完整保存； 2. 最大限度保存组织或细胞成分的抗原性； 3. 抗原不弥散，以保证其准确定位。 一、组织取材 （一）一般原则 1、厚度 0.2 ～0.3cm ；面积 1 ～ 1.5cm2。 2、皮肤、腔道器官及囊壁组织等应剪成 细条，如过长可将其缠绕成同心圆状。 3、骨组织需先经脱钙处理。 4、若需保存新鲜组织，应将所取织用锡箔纸包好，入液氮速冻，然后置-70 C冰箱中。 （二）、取材注意事项 1、刀剪应锋利、避免前后拉动和挤压。 2、应避开坏死组织和血凝块，去掉异物。 3、应取病变主体、病变与正常交界和正常组织各一块。 二、细胞取材及制片 1、印片法：操作简单、细胞抗原保存完好。 2、穿刺法：直接涂片或离心后涂片。 3、沉淀法：先离心后涂片。 4、活细胞标本制备：将细胞直接培养在盖玻片上（细胞爬片），或培养于培养瓶或培养板内，制成细 胞悬液，再涂片。 第二节 固定及常用固定剂 一、概念：将组织浸入某些化学试剂，使细胞内的物质能尽量保持其生活状态时的形态结构和位置，这 一过程称。 二、固定的作用 1、保持组织、细胞与生活时相似的结构和形态，防止离体组织自溶和细菌繁殖导致的组织腐败。 2、保持定位细胞内特殊的成分，如细胞内的一些蛋白质经过固定，可沉淀或凝固定位在细胞的原有部 位。 3、固定可使组织细胞中各种成分沉淀、凝固并易着色，便于区别不同的组织成分。 4、固定剂兼有组织硬化的作用，有利于切片。 5、有利于保存抗原及DNA、RNA ，为免疫组化染色和核酸原位杂交做准备。 三、组织固定的注意事项 1、取材后要及时固定，尤其是温度高的季节。 2、容器：最好选择广口的容器，一是避免组织受挤压变形，二是方便取材时易于取出。 3、固定液要足量，至少应为组织块总体的5倍以上。 4、根据不同研究目的选择不同的固定液。 5、固定时间：视组织块大小、固定温度、固定液种类而定。大标本除延长固定时间外，还应做多个切 面固定，以免固定不均匀。 四、固定方法 1、浸泡法。 2、蒸汽固定法：常用于固定组织中的可溶性物质。 3、注射灌注固定法：4、滴加法：细 胞涂片。5、微波固定法（63 ～650C）。 五、常用固定液及其配制 （一）单纯固定液：由单一化学物质组成。 1、甲醛 （2）性质：交联性组织固定剂，主要通过使蛋白质分子发生交联而产生固定作用。它虽不能使白蛋白 和核蛋白沉淀，但能与蛋白质中许多氨基酸反应。 （3）适用范围：适合多种特殊染色，对脂类和类脂体、神经及髓鞘均有良好的固定效果； （4）使用浓度：10%，即10ml原液（40%）加90ml的水，此液的甲醛实际浓度为4%。 2、中性甲醛：以pH7.2 ～7.4的磷酸缓冲液（PBS）为溶剂配制的甲醛溶液。优点：固定效果及对组织抗 原性的保存均优于一般甲醛溶液，是科研用组织最常用的固定液。 3、酒精 （1）优点：具有硬化、固定、脱水等作用，还能保存糖原和尿酸结晶。 （2）使用浓度：固定组织用80% ～95%为好，70%的酒精可用于保存组织。 （3）缺点：组织渗透力较弱；能沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白，核蛋白沉淀后能溶于水，使核染色不 良；高浓度酒精固定的组织硬化显著，组织收缩明显且脆，既影响切片，又致组织形态改变，影响诊 断；溶解脂肪、类脂质和血红蛋白，还损害其它色素，有时也可影响诊断，故多不使用。 （二）混合固定液 1、A-F液（酒精-甲醛固定液）：固定兼脱水，固定后可直接入95%酒精脱水。 2、Bouin液 （1）优点：渗透力强，对组织固定均匀，收缩很小，不会使组织变硬变脆，适用于睾丸活检等小组织 的固定。 （2）固定时间：小块组织只需数小时，较大脏器固定12 ～24小时。 （3）配制方法： 3、Zenker液 （1）优点：此液固定的标本，胞核和胞质染色清晰。 （2）固定时间：12 ～24小时。He染色中最好的固定液。 4、Carnoy液 （1）优点：穿透力强，能很好地固定胞质和染色质，特别适合固定外膜致密的组织。在固定组织的同 时，能溶解大部分脂肪。也使用于糖原及尼氏小体的固定，对显示DNA和RNA的效果很好。 （2）固定 时间：小块组织固定1 ～2小时。 第三节 组织的脱水、浸蜡和包埋 一、脱水 指用某些溶媒置换组织内水分的过程。脱水剂必须能与水任意比例混合。常用的脱水剂有酒精、丙酮及 叔丁醇。 二、透明 组织块中的水分被溶剂所取代，组