微生物的革兰氏染色实验报告.pdfVIP

一、实验目的 1.了解革兰氏染色的原理 2.掌握革兰氏染色的操作方法 二、实验原理 根据细菌的细胞壁结构和成分不同，可用革兰氏法将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴 性菌。阳性菌由于细胞壁厚，肽聚糖含量高，交联度大，当乙醇脱色时，肽聚糖因脱水 而孔径缩小，故结晶紫-碘复合物被阻留在细胞内，细胞不能酒精脱色，仍呈紫色；阴 性菌由于肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，因其含脂量高，乙醇将 脂溶解，缝隙加大，结晶紫- 碘复合物溶出细胞壁，乙醇将细胞壁脱色，细胞无色，碱性品红复染后呈红色。 三、实验材料及仪器 1.实验材料：枯草芽孢杆菌（或大肠芽孢杆菌）、草酸铵结晶紫染色液、碘液、95%乙 醇、碱性品红染液、载玻片、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、废水缸、胶头滴管、 酒精灯 2.仪器：油镜、接种环 四、实验步骤 1.涂片：挑一环蒸馏水于载玻片中央，再用接种环挑取少量芽孢杆菌与玻片上的水滴均 匀混合，并涂成约1cm^2的薄菌膜； 2.固定：将涂片在空气中干燥，手持玻片一端，有菌膜的一面朝上，玻片在微火上快速 通过3次，以让菌膜更加牢固地贴在玻片上，待冷却后滴加染料； 3.染色： （1）初染：手持玻片一端，滴加草酸铵结晶紫染液染色2min后，倾去结晶紫染液，将 玻片倾倒一定角度，用细小的水流小心地冲洗，直到玻片上的水流无色，再用吸水纸小 心将水吸干；（2）媒染：滴加碘液染色2min后，按照上述步骤用细小水流小心冲洗； （3）脱色：滴加95%乙醇，将玻片稍微摇晃几下后立即倾去乙醇，如此重复2～3次， 立即水洗，再用吸水纸吸干，以终止脱色； （4）复染：滴加碱性品红染色3min，水洗后用吸水纸吸干； （5）镜检：先在4倍、10倍、40倍的低倍镜下分别观察细菌，找到最好的视野，再在 载玻片上滴加香柏油，转到100倍的高倍镜，使镜头完全浸在油中，观察细菌，使用完 毕后用二甲苯擦洗镜头。 五、实验结果 细菌呈现紫色，较分散，个别聚集成链状，为革兰氏阳性菌（枯草芽孢杆菌）。 六、注意事项 1.涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阴性； 2.刮取细菌涂片后要将接种环进行过火，直到接种环前面的圆环烧红烧透为止； 3.应选活跃生长的菌种染色，老龄的革兰氏阳性菌会被染成红色，造成假阴性； 4.使用染液时应避免粘在衣物上； 5.结晶紫染液应完全覆盖在菌膜上； 6.使用乙醇时勿靠近火焰； 7.实验前后要洗手； 8.实验后整理操作台，用二甲苯擦拭镜头，以保持仪器的清洁。 七、实验分析及讨论 1.革兰氏染色时，关键的环节是脱色，脱色不够，造成假阳性，脱色过度，造成假阴性 。 2.固定时烘烤也要适度，太轻会在冲洗时冲走细菌，过度会破坏细菌形态。 八、作图 Poeed TCPDF (.cpdf.o)