猪人工授精实验室关键技术朱士恩.pptxVIP

猪人工授精实验室关键技术朱士恩会计学报告内容第1页/共43页猪人工授精的历史及现状猪人工授精的意义猪人工授精的实验室设备猪精液的人工采集猪精液的品质检查猪精液的保存处理猪精液处理后输精我国始于上世纪50年代，未达到理想的推广程度目前该技术已成为猪配种繁殖的主要手段之一20世纪90年代后，该技术得到迅速普及该技术始于20世纪30年代，已有70多年的历史猪人工授精的历史及现状第2页/共43页减少饲养头数，充分发挥优秀公猪的遗传潜力减少疾病传播，提高生产效率，获得更高的经济效益与繁殖控制技术结合，利于现代化养猪技术体系建立精液保存技术的发展，加快猪育种进程公畜使用不受其生理年限限制便于引入外源群体基因，加快遗传进展的扩散速度精液的冷冻保存，可降低活体保种成本，防止基因漂变实现科学养猪，养猪生产规模化，现代化的重要手段猪人工授精的意义第3页/共43页显微镜、精子密度测定仪、电子天平 、恒温水浴锅、恒温精液保存箱、pH计（试纸）、 精子计数数器、移液器等 消耗品 仪 器 器 皿温度计、量筒、烧杯、保温瓶、采精杯、玻璃棒等纱布、输精瓶、输精管、乳胶手套、采精袋 、 稀稀释粉等猪人工授精的实验室设备第4页/共43页猪精液的采集第5页/共43页采集前的准备工作猪精液采精的方法精液采集前的准备工作第6页/共43页实验室的准备操作人员的准备精液稀释液准备采精器皿的准备检测仪器的准备分装器皿的准备采精公猪的准备猪的人工采精方法第7页/共43页电刺激采精法假阴道采精法手握采精法采精流程 一手带双层手套，另一手持集精杯用温的生理盐水清洗猪腹部和包皮 公猪伸出阴茎时，脱去外层手套 用手紧握伸出的公猪阴茎螺旋状龟头顺其向前冲力将阴茎的“S”状弯曲拉直 收集浓份精液于集精杯的一次性采精袋 成年公猪：2次/ 周 采精频率青年公猪： 1次/周 手握采精法第8页/共43页猪精液的品质检查第9页/共43页品质检查的目的精液外观检查精液显微镜检查精液的外观检查 第10页/共43页颜 色 乳白色或浅灰色呈云雾状 绿色、黄色 浅红色、红褐色 正常异常气 味略带腥味 恶臭等异常气味 异常正常pH值正常精液pH值为 7.0~7.8pH值越低, 精子密度越大 采精量 电子天平称量法按1g = 1 ml计 射精量为200~500 ml 精液的显微镜检查 第11页/共43页精子活率检查精子密度检查精子畸形率检查玻片升温至37℃ 400倍观察精子 取精液10μl制片 相差显微镜下 于37℃恒温台上 鲜精活率＞0.7才可进行稀释配制 保存精液活率＞0.6才可以使用 精子活率检查第12页/共43页与受精能力相关 精液品质的指标 精子活率按0.1~1.0的十级评分法进行评估 目测估测法活率要求＜一个精子为“密”＝一个精子为“中”＞一个精子为“稀”精子密度检查第13页/共43页估测法 主观性强，误差大精子密度仪法 方便、时间短、重复性好原精液200μL3%NaCl稀释10倍血细胞计数法 计数板上放盖玻片最准确，但速度慢滴上1滴稀释精液计数5个中方格精子猪精子密度一般为2~3亿/ml生产上主要以精子密度仪法检测 将该数乘以50万第14页/共43页精子计数共有两个对称的计数室用吸管稀释后精液注入计数室注意：让稀释后的精液通过毛细作用自行吸入！精子计数第15页/共43页精子计数室及一个中方格第16页/共43页精子计数方法第17页/共43页以图示次序计数，精子的头部为准，依数上不数下，数左不数右的原则进行计数格线上的精子。白色精子不计数计算公式第18页/共43页 1ml原精液内的精子数＝5个中方个数的精子数×5 ×10 ×1000 ×稀释倍数 （如为原精液不× 稀释倍数）畸形率检查方法 染色后显微镜观查 畸形率要求 相差显微镜直接观察伊红或姬姆萨等染色后普通显微镜观察固定液固定20min置1000倍油镜下观察精子＞ 300个水洗并风干Giemsa染色90min取中层精液抹片 一般要求不超过18%为宜精子畸形率检查第19页/共43页荧光显微镜下观察精子的活力和顶体状态流式细胞仪观察精子的活力和顶体状态A)B)C)A.死精子区域:PI,阳性;AnV-FITC,阴性。B.死精子区域:PI,阳性;AnV-FITC,阳性。 C.活精子区域:PI,阴性;AnV-FITC,阴性。 D.活精子区域:PI,阴性;AnV-FITC,阳性。H33342 标记所有精子细胞核呈现蓝色荧光；PI标记死精子的细胞核呈现红色荧光；发生顶体反应或顶体膜破损的精子被FITC-PNA 标记,呈现绿色顶体。仪器观察精子活力及膜的完整性第20页/共43页精液的冷冻及解冻精液的稀释精液的分装精液的运输精液的保存猪精液的保存处理第21页/共43页器具须消毒，使用前，用少量稀释液冲洗一遍品质检查不合格(活率