蛋白质表达和抗体制备.pptVIP

关于蛋白质表达和抗体制备 第一页，共三十二页，2022年，8月28日 常用蛋白表达系统(host) 原核：大肠杆菌。 真核：酵母、昆虫、哺乳动物、植物。 第二页，共三十二页，2022年，8月28日 大肠杆菌表达系统 大肠杆菌是基因工程研究中采用最多的原核表达体系。 优越性： ①对大肠杆菌的基础生物学、分子遗传学等背景知识和基因表达的调控机理已有了深刻了解； ②商品化的载体和菌株种类非常齐全； ③表达效率高； ④易培养，成本低。 缺点： ①因分泌能力不足，真核蛋白质常形成不溶性的包含体； ②蛋白质不能糖基化； ③其内毒素很难除去。 第三页，共三十二页，2022年，8月28日 酵母表达系统 优越性： ①蛋白可糖基化，有相对正确的天然结构，可很好的生产分泌型蛋白； ②表达载体为整合型质粒，载体中含有与酵母染色体中同源的序列，因而比较容易整合入酵母染色体中，实现高效率表达； ③表达载体都为E.coli/Pichia Pastoris的穿梭载体，可在获得克隆后采用E.coli细胞大量 扩增。 ④易培养，成本低,可高密度发酵。 缺点： ①糖基化与哺乳动物有所差别； ②培养上清多糖浓度高，不利于纯化。 第四页，共三十二页，2022年，8月28日 昆虫细胞表达系统 利用重组杆状病毒在昆虫细胞体系中表达外源蛋白是目前较为流行的表达方式。 优越性： ①重组蛋白具有完整的