糖酵解中间产物鉴定实验操作步骤.doc

PAGE 糖酵解中间产物鉴定实验操作步骤 一、实验目的 了解糖酵解过程的某一中间步骤及利用抑制剂来研究中间代谢的方法。 二、实验原理 利用碘乙酸对糖酵解过程中3-磷酸苷油醛脱氢酶的抑制作用，使3-磷酸苷油醛不再向前变化而积累。硫酸肼作为稳定剂，用来保护3-磷酸苷油醛是不自发分解。然后用2，4-二硝基苯肼与3-磷酸苷油醛在碱性条件下形成2，4-二硝基苯肼-丙糖的棕色复合物，其棕色程度与2-磷酸苷油醛含量成正比。 三、仪器、原料和试剂 （1）仪器：试管（1.5×1.5cm）、吸量管（1ml、2ml3ml）、恒温水浴、烧杯（50ml）。 （2）原料：新鲜酵母。 （3）试剂： ①2，4-二硝基苯肼：0.1g2，4-二硝基苯肼溶于水100ml 2mol/L盐酸溶液中，贮于棕色瓶中备用。 ②0.56mol/L硫酸肼溶液：称取7.28g硫酸肼溶于50ml水中，这时不会全部溶解，当加入NaOH使pH达7.4时则完全溶解。此液也可用于水合肼溶液配制，可按其 分子浓度稀释至0.56mol/L，此时溶液呈碱性，可用浓硫酸调pH至7.4即可。 ③5%葡萄糖溶液。 ④10%三氯乙酸溶液。 ⑤0.75mol/LNaOH溶液。 ⑥0.002mol/L碘乙酸溶液。 四、操作步骤 （1）取小烧杯3只，分别加入新鲜酵母0.3g，并按下表分别加入各试剂，混匀。 杯号 5%葡萄糖加入量/ml 10%三氯醋酸加入量