植物细胞工程2(中国药科大学生物工程所有课件).pptxVIP

第四节 植物原生质体培养技术;;;;;;;;;;一、诱导融合的方法;无机盐诱导融合: NaNO3法;1973年：Keller用pH10.5的50 mM CaCl2溶液在37℃时，诱发烟草叶肉原生质体融合。;PEG法特点：;PEG法原理;;最为常用。 具体做法：在无菌条件下混合双亲原生质体----滴加PEG溶液，摇匀，静置---滴加高钙-高pH溶液，摇匀，静置---滴加原生质体培养液洗涤数次---离心获得原生质体细胞团---筛选---再生杂合细胞;电融合法;;;三、杂合体的鉴别与筛选;;;;转基因植物（Transgene plant）是指利用植物遗传工程进行DNA重组，将优良的目的基因稳定的整合到植物的基因组中，并在子代中得到有效的表达，获得具有新的遗传性状的植物体。;（一）农杆菌转化法;第二十七页，共七十三页。; 转移DNA，编码冠瘿碱的合成，能随机整合到植物的染色体上。长度一般为12-24kb，是Ti质粒最重要的部分。;毒性基因（vir）;Ti 质粒的改造;第三十一页，共七十三页。;农杆菌叶盘转化法的操作 ;第三十三页，共七十三页。;农杆菌转化的优点： 1.农杆菌转化方法是一种生物转化系统，因而具有主动性。 2.通过农杆菌转化系统获得转基因植株还具有拷贝数低。转基因较少沉默以及转基因片段较长等优点。 农杆菌转化的缺点： 1.有致瘤的危险 2.不是单子叶植物的寄主。;（二）基因直接