流式细胞仪分析技术.pptxVIP

流式细胞仪分析技术; 流式细胞术(flow cytometry, FCM)是20世纪70年代发展起来的一种以流式细胞仪为工具，能快速测量细胞的物理或化学性质，如大小、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等，并可对其分类、收集的高新技术。; 流式细胞术（FCM）借鉴了荧光显微镜技术, 同时利用计算机技术、激光技术、电子技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学等多门高新技术的发展, 将荧光显微镜的激发光源改为激光, 使之具有更好的单色性与激发效率, 因而大大提高了检测灵敏度, 同时将固定的标本台改为流动的单细胞悬液, 用计算机进行数据处理, 从而大大提高了检测速度与统计精确性, 而且从同一个细胞中可以同时测得多项参数, 被誉为是细胞分析领域的“CT”。; 流式细胞术（FCM）以其快速、灵活、大量、灵敏和定量的特色，广泛应用于基础研究和临床实践各个方面，包括细胞生物学、肿瘤学、血液学、免疫学、药理学、遗传学及临床检验学等，在各学科领域发挥着重要的作用。;第一部分 流式细胞仪的分析及分选原理 第二部分 数据的显示与分析 第三部分 流式细胞仪免疫分析的技术要求 第四部分 流式细胞术在免疫学检查中的应用 第五部分 应用举例; 流式细胞仪是将流体喷射技术、激光技术、空气技术、γ射线能谱术及电子计算机等技术与显微荧光光度计密切结合的一种非常先进的检测仪器。 ; 该仪器具有高度的精密性，测定的数据准确可靠。既可分析单个细胞，也能区分群体细胞，检测的速度可达5000个细胞/秒，分选纯度可高达99%以上。 由于该仪器的多参数性、准确性、快速性及分选的高纯度性等特点，所以在细胞生物学、免疫学、肿瘤学、病理学及临床医学等领域中得到越来越广泛的应用。 ;;; 经荧光色素染色的细胞或包裹在鞘液里的其他生物微粒，从50－100μm的喷嘴逐个高速喷出，通过一个聚焦的光源，进而通过各种光敏元件测量这些细胞或微粒所发射的散射光以及荧光，经计算机分析和处理可得到多种信息参数。;结构示意图;单细胞液柱; （1） 液流系统 （2） 光学系统 （3） 数据处理系统;;;FCM的液流系统（如何形成单个细胞流）;;;; 细???在液柱中与激光束相交时向周围360°立体角方向散射的光线信号，它的强弱与细胞的大小、形状、胞内颗粒折射等有关，主要分为前向散射光和侧向散射光。;;;;;;;;荧光染料的特性;;; 通过流式细胞仪进行细胞分选主要是在对具有某种特征的细胞需进一步培养和研究时进行的。;细胞悬液形成液流柱;;;;;;单参数直方图;;1.双参数直方图点图;双参数直方图点图;2. 二维等高图;二维等高图;3. 假三维等高图;（三）三参数直方图;;;A 淋巴细胞 B 单核细胞 C 中性粒细胞;线性门;;D1 CD4+/CD3- D2 CD4+/CD3+ D3 CD4- /CD3- D4 CD4- /CD3+;;;;;;名称;;;;;;;通过对标记不同荧光素分子的检测，实现FCM对可溶性物质的定量分析;;温度 pH 染料浓度 固定剂 ;;; 流式细胞术目前已广泛地被应用于免疫学基础研究和逐步进入临床应用各方面，用流式细胞仪对细胞表面的抗原成分进行标记分析，可区别多种细胞的特性，为细胞免疫的研究增加了有效的手段和帮助。 ;;;;;;小 结;;;;;