选修DNA和蛋白质技术教材专题.pptxVIP

选修1;第2页/共65页;一、DNA的粗提取和鉴定 1．DNA的粗提取原理 (1)根据DNA的溶解性，DNA和蛋白质等其他成分在不同 浓度的NaCl溶液中溶解度不同。如图表示DNA在NaCl溶液中的溶解度随着NaCl溶液浓度变化而变化的曲线。 (2)根据DNA ，可用95%的冷酒精析出 DNA。 (3)根据DNA对 的耐受性。;2．DNA的提纯 (1)方案一：利用DNA在 不 同的原理，通过控制NaCl溶液的浓度除去杂质。 (2)方案二：直接在DNA滤液中加入 ，其中的 能够分解蛋白质。 (3)方案三：将DNA滤液放在 的恒温水浴箱中 保温10～15 min。;3．DNA的鉴定 (1)所用试剂： 。 (2)处理方法：将试剂与DNA溶液混合后 5 min。 (3)现象：溶液颜色变 。;二、多聚酶链式反应扩增DNA片段 (1)PCR原理： 。;(2)PCR的反应过程： ①变性：当温度上升到 以上时，双链DNA解聚为 。 ②复性：温度下降到50℃左右时，两种 通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。 ③延伸：温度上升到 左右时，溶液中的4种脱氧核苷酸(A，T，C，G)在 的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。;④PCR反应的结果： DNA聚合酶只能特异地复制 的DNA序列，使这段固定长度的序列呈 扩增。;三、血红蛋白的提取和分离实验 1．凝胶色谱法的原理 凝胶色谱法(也称分配色谱法)是根据 将不同分子分离开来，即： 的蛋白质容易进入凝胶内部通道，路程较长，移动速度 ；而 蛋白质不能进入凝胶内部，则移动速度 ，从而使相对分子质量不同的蛋白质得以分离。;2．血红蛋白分离实验操作;第11页/共65页;考点一;[做一题] [例1]　回答下列有关“DNA的粗提取与鉴定”实验的问题。 (1)下列有关“DNA的粗提取与鉴定”实验原理的叙述正确的 是 (　　) A．DNA在NaCl溶液中的溶解度，随NaCl溶液浓度的降 低而减小 B．利用DNA不溶于酒精的性质，可除去细胞中溶于酒 精??物质而得到较纯的DNA C．DNA是大分子有机物，不溶于水而易溶于有机溶剂 D．在沸水中，DNA遇二苯胺会出现紫色反应;(2)由于鸡血较难找到，某学生试图用人血代替，结果没 有成功，其原因最可能是 (　　) A．操作方法不对　　　　　 B．人血含DNA太少 C．NaCl溶液浓度太高 D．加二苯胺太少;(3)下图为该实验过程中的一些重要操作示意图：;①正确的操作顺序是________________________。 ②上图C、E步骤都加入蒸馏水，但其目的不同，分别是________________和________________。 ③上图A步骤中所用酒精必须是经过________才能使用，该步骤的目的是________。 ④为鉴定A中所得到的丝状物的主要成分为DNA，可滴加________试剂，沸水浴，如果出现________则该丝状物的主要成分为DNA。;[解析]　 (1)DNA在NaCl溶液中的溶 解规律如右图所示。DNA不溶于酒 精等有机溶剂，在沸水浴条件下， DNA遇二苯胺后呈现蓝色。 (2)由于人属于哺乳动物，成熟的红细胞中不含细胞核、线粒体，所以几乎不含DNA，很难提取到DNA。;(3)DNA粗提取的过程为：红细胞加蒸馏水，涨破后过滤→用2 mol/L NaCl溶解→过滤除去不溶杂质→加蒸馏水，析出含DNA的黏稠物→过滤→黏稠物溶解在2 mol/L NaCl中→过滤→溶于95%酒精进一步提纯，所以根据图示及以上分析，正确操作顺序为C→B→E→D→A。;[答案]　 (1)B　(2)B　(3)①C→B→E→D→A ②加速血细胞的破裂　降低NaCl溶液的浓度，使D