琼脂糖凝胶电泳技术的原理和方法.pptxVIP

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2023-02-23 发布于四川
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琼脂糖凝胶电泳技术的原理和方法.pptx

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实验三琼脂糖凝胶电泳技术的原理和方法;一实验目的;二实验原理;琼脂糖浓度(%);三仪器、材料与试剂;1.凝胶电泳系统;?2.凝胶成像分析系统;3.Marker;4.常用电泳缓冲液;4.常用核酸染料;溴化乙锭;1.制备琼脂糖凝胶（1%） 2.制备凝胶板 3.加样 4.电泳 5.染色 6.结果观察 ;1.制备凝胶和胶板： 20ml(1×TAE)+0.2g琼脂糖（三角瓶），煮胶，溶解，冷却至60℃(不烫手)，倒板，室温下充分凝固，竖直拔下梳子。;5μl质粒DNA+1μl loading buffer 混匀； 15μlPCR产物+3μl loading buffer，混匀； 10μl酶切产物+2μl load- ingbuffer混匀； 5μl DNA Marker(每板胶一孔）;3.电泳;4.观察;六实验结果;第18页，共21页。; 琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质，不带电荷。琼脂糖链依分子内和分子间氢键及其它力的作用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖束，构成大网孔型凝胶。 ; DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即DNA分子本身的大小和构型。当DNA分子大小超过20kb时，普通琼脂糖凝胶就很难将它们分开，此时电泳的迁移率不再依赖于分子大小，因此，应用琼脂糖凝胶电泳分离DNA时，分子大小不宜超过此值。;谢谢！